| 研究概要 |
本研究は,分裂酵母をモデル実験系として相同組換えによるDNA修復機構を明らかにしようとするものである。本年度は,以下の成果を得た。
(1)試験管内組換え反応系の構築とこれを用いた反応機能の解析
Rad51,Rad22,RPA,Swi5,Sfr1タンパク質のリコンビナントによる発現系および精製法を確立し、試験管内鎖交換反応を確立した。この系を利用して、Rad22,Rad51,Swi5-Sfr1,RPAそれぞれのコンポーネントの役割を解析した。特に、重要なことは、Rad22が、組換えの反応の順序を厳密に制御しているin vitroの証拠を示すことができたことである。
(2)DNA二重鎖切断修復産物をモニターする系の構築
T.Humphreyの開発した実験系を改良して、DNA二重鎖切断修復産物をモニターするシステムを構築し、2種類のメデエーター(Swi5-Sfr1とRad55-Rad57)の、機能的差異を解析した。その結果、Rad55-Rad57は交差型組換え産物の生成に必須であるが、Swi5-Sfr1は必ずしも必須ではないことを明らかにした。
(3)Slr9の解析
新規組換えタンパク質として同定したslr9の、体細胞分裂期のリン酸化状態と減数分裂期の役割を解析した。
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