| 研究課題/領域番号 |
16370051
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
緒方 一博 横浜市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90260330)
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| 研究分担者 |
佐藤 光 横浜市立大学, 医学部, 助手 (90300962)
椎名 政昭 横浜市立大学, 医学部, 助手 (30347299)
浜田 恵輔 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00344052)
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| キーワード | 転写制御因子 / 転写制御因子高次複合体 / Runx1 / c-Myb / C / EBP / プロモーター / アロステリック / 核磁気共鳴法 |
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| 研究概要 |
転写制御因子Runx1のDNA結合活性は、DNA非結合性の転写制御因子CBFβとヘテロダイマーを形成することにより上昇することが知られている。本研究室では、以前Runx1-CBFβ-DNA複合体の結晶構造解析を報告し、CBFβによるRunx1のDNA結合活性の上昇がRunx1の構造的揺らぎの安定化によってもたらされることを示唆した。今回、揺らぎと機能との関連を詳細に調べるため、核磁気共鳴法を用いた磁気緩和時間測定を行った。
現在までに、Runx1-DNA複合体およびRunx1-CBFβ-DNA複合体中でのRunx1のアミドプロトンシグナルの帰属をほぼ完了した。磁気緩和パラメーター測定法について、R1,R2およびSteady-state NOEのTROSY化を行い、各複合体中でのRunx1のこれらの磁気緩和パラメーターの測定を終了した。さらに揺らぎの時間スケールを詳細に解析するために、現在T1rhoについて、Mulderらが報告したOff-resonance T1rhoを独自にTROSY化したパルスプログラムを用いて測定中である。
C/EBPは、塩基性ロイシンジッパー型の転写制御因子であるが、他の転写制御因子と異なり、ホモダイマーとして多様な塩基配列を認識することが知られている。この分子機構について調べるため、C/EBPが認識する様々な天然プロモーターの塩基配列を含むDNAとC/EBPとの複合体を形成させ、X線結晶構造解析を行った。また、これらのDNAとC/EBPとの結合活性を生化学的に解析した。現在、C/EBPの1次構造および3次構造から、C/EBPに特徴的な残基を同定し、その残基に変異を導入して同様の解析を行っている。
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