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2004 年度 実績報告書

バクテリア・セントロメア様配列migSの染色体分配機構における分子機能の解明

研究課題

研究課題/領域番号 16370082
研究種目

基盤研究(B)

研究機関国立遺伝学研究所

研究代表者

仁木 宏典  国立遺伝学研究所, 放射線・アイソトープセンター, 助教授 (70208122)

キーワード大腸菌 / 染色体 / 分配 / セントロメア / 複製起点 / 遺伝子破壊株
研究概要

大腸菌の染色体に見いだしたセントロメア様の機能配列migSに結合するタンパク質の同定を中心に本年度の研究を進めた。DNA配列特異的な因子の分離方法として合成DNAと磁気ビーズを使った分離・精製方法を用いた。まず、合成migS配列を磁気ビーズに結合し、これを大腸菌の細胞破砕分画のうちの可溶化分画と混合し、そののち、磁力により磁気ビーズを回収した。回収した磁気ビーズに非特異的に結合しているタンパク質を除去するため、バッファーを用い洗浄処理を行った。この磁気ビーズからに結合しているタンパク質を回収したのち、SDS電気泳動ゲルに展開した。十本ほどのタンパク質のバンドが検出されたので、そのすべてについて質量分析にて遺伝子産物の同定を行った。これにより遺伝子の決まったものについて、次は遺伝子破壊株の作成を行った。まず、3遺伝子についてその破壊株を作成し、この変異株でのmigSの機能を調べた。migSが正常に働いている細胞では、複製した染色体がすみやかに両極に分離するため、複製起点領域oriCは細胞局付近に位置することになる。これを指標として検定した結果、2つの遺伝子破壊株でmigSの機能が損なわれていた。さらに、これらのタンパク質因子が試験管内でmigS配列特異的に結合するか調べるため、それぞれのタンパク質の精製を行った。一方、migS結合因子の細胞内局在性を知るため、蛍光標識タンパク質法を試みた。GFP遺伝子をこれら因子の遺伝子とC末で融合するような変異株を作成した。作成した株では、細胞全体に蛍光が観察された。さらに、融合遺伝子産物が正常な機能を保持しているか検討している。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2004

すべて 雑誌論文 (2件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] migS, a cis-acting site that affects bipolar positioning of oriC on the Escherichia coil chromosome.2004

    • 著者名/発表者名
      Yamaichi, Y., Niki, H.
    • 雑誌名

      EMBO J. 23

      ページ: 221

  • [雑誌論文] 原核生物染色体の分配起点2004

    • 著者名/発表者名
      仁木 宏典
    • 雑誌名

      蛋白質核酸酵素 49

      ページ: 2017

  • [図書] ゲノミクス・プロテオミクスの新展開 生物情報解析と応用 第1編第1章第1節2004

    • 著者名/発表者名
      仁木 宏典
    • 総ページ数
      10(1282)
    • 出版者
      株式会社エヌ・ティ・エス

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公開日: 2006-07-12   更新日: 2016-04-21  

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