結核菌由来ヒトT細胞エピトープの同定とマルチエピトープDNAワクチンの開発

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16390130
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 永田 年 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024)
• 研究分担者: 小出 幸夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30126809) ; 内嶋 雅人 浜松医科大学, 医学部, 助手 (20252174)
• キーワード: DNAワクチン / 結核 / MPT51 / CTLエピトープ / Thエピトープ / HLAトランスジェニックマウス

研究概要

1)H2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスの作製 日本人に多いHLA-A^*2402を発現するH2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスを作製を試みた。HLA-A^*2402発現プラスミドをβ2-ミクログロブリンKOマウス胚に導入し、PCR法によりHLA-A^*2402トランスジェニックマウスのスクリーニングをし、遺伝子の導入を確認した1系統を維持している。このマウス脾細胞表面のHLA-A^*2402分子の発現を蛍光抗体法で確認したが、それは弱いものであった。
2)MPT51 CTLエピトープの検索 MPT51抗原について、HLA-A^*0201トランスジェニックマウスへのMPT51 DNAワクチン投与により、MPT51 p51-60ペプチド特異的IFN-γ産生を認め、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CTLエピトープである可能性を示した。このことは、この実験系がCTLエピトープの同定に有効であることを示すものである。
3)HLA-A^*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的T細胞の検出 そこで、BCG接種履歴のあるHLA-A*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51p51-60ペプチド特異的メモリーT細胞の検出を試みた。その結果、2人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血を1週間このペプチドで刺激した後、MPT51 p51-60ペプチド/HLA-A^*0201テトラマー陽性CD8^+ T細胞の増殖を認めた。また、1人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血をこのペプチドで刺激したところ、高いIFN-γの産生を認めた。これらのことは、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CD8^+ T細胞エピトープであることを示している。
4)MPT51 Thエピトープの検索 HLA-DR0401トランスジェニックマウスへのMPT51 DNAワクチン投与により、MPT51 p191-210ペプチド特異的IFN-γ産生を認め、このペプチドがHLA-DR0401拘束性Thエピトープである可能性を示した。このことは、この実験系がThエピトープの同定にも有効であることを示すものである。

研究成果

• [雑誌論文] Immunization with dendritic cells retrovirally transduced with mycobacterial antigen 85A gene elicits the specific cellular immunity including cytotoxic T-lymphocyte activity specific to a dominant epitope on antigen 85A. (2006)
  • 著者名/発表者名: Nakano, H., Nagata, T., Suda, T., Tanaka, T., Aoshi, T., Uchijima, M., Chida, K., Nakamura, H., Okada, M., Koide, Y.
  • 雑誌名: Vaccine 24 ページ: 2110-2119
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Immunization with gene encoding granulocyte-macrophage colony-stimulating factor inserted with a single helper T-cell epitope of an intracellular bacterium induces a specific T-cell subset and protective immunity. (2006)
  • 著者名/発表者名: Nagata T., Uchijima, M., Uchiyama, H., Yamada, T., Aoshi, T., Koide, Y.
  • 雑誌名: Vaccine 24 ページ: 4538-4553
• [雑誌論文] Curcumin Maintenance Therapy for Ulcerative Colitis : Randomized Multicenter Double Blind Placebo-Controlled Clinical Trial. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hanai, H., Iida, T., Takeuchi, K., Watanabe, F., Maruyama, Y., Andoh, A., Tsujikawa, T., Fujiyama, Y., Mitsuyama, K., Sata, M., Yamada, M., Iwaoka, Y., Kanke, K., Hiraishi, H., Hirayama, K., Arai, H., Yoshii, S., Uchijima, M., Nagata, T., Koide, Y.
  • 雑誌名: Clinical Gastroenterology and Hepatology 4・12 ページ: 1502-1506