研究課題
血管内皮細胞に存在する膜型コレクチンCL-P1は常在性の膜蛋白であり、すべての血管に存在する。我々は、平成14年度〜16年度の文部科学省科学研究補助金(基盤研究(B)(2)課題番号13470139)による研究の過程で、上記タンパク質を世界で初めて同定した(JBC 2001)。本研究では、本CL-P1の分泌型分子の血中での測定システムを樹立して、血管損傷の定量的検査法を開発するための基盤研究をおこなうことを目的とする。初年度は、リコンビナント分泌型CL-P1の作成とCL-P1の単クローン抗体の作成を行った。平成17年度は、前年度で得られたCL-P1の単クローン抗体を用いて、その反応性について比較検討を行った。得られた8種類のCL-P1の単クローン細胞から、腹水化を行い、精製抗体を作成した。精製抗体は、イムノグロブリンサブタイプとしては、すべてIgG1であった。抗原をプレートに固層化しての反応性を、ELISA法で測定した結果、すべての抗体は、免疫抗原であるCL-P1CRDと高い反応性を示した。しかしzebrafishCL-P1CRDに対しては、ほとんど反応しなかった。さらに変性条件下での反応を、SDS-PAGE,ウエスタンブロット法にて解析した。抗体のなかで半数は、還元条件と非還元条件の両条件で、同じような反応性を示した。免疫染色については、CL-P1発現細胞で検討を行った。その結果、半数の抗体は、免疫染色においても、ヒトCL-P1を特異的に認識した。現在、各種ヒト組織において、単クローンとポリクローナル抗体を用いて、免疫組織染色を行っている。また、微量測定系については、再度単クローンとポリクローナル抗体を用いて、高感度測定システムの樹立を試行錯誤しながら進めている。
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