汎用性抗原提示人工細胞とペプチドによるヒト細胞障害性T細胞簡易誘導法の開発と応用

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16390294
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 土屋 滋 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30124605)
• 研究分担者: 久間木 悟 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (20311566) ; 峯岸 正好 東北大学, 病院・助教授 (20211592) ; 笹原 洋二 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (60372314)
• キーワード: 人工抗原提示 / テトラマー解析 / 細胞障害性T細胞

研究概要

今年度は、主に慢性活動性EBV感染症(CAEBV)や伝染性単核球症(IM)に的を絞り、MHC-Igとともに確立されてきたテトラマー解析による細胞障害性T細胞(CTL)の同定をおこない、また人工抗原提示細胞としては、EBVにより樹立された自己Bリンパ芽球様細胞株(B-LCL)を使用したCTLの誘導法について検討した。
1.テトラマー解析によるEBV感染細胞特異的CTLの同定。
HLA-A24特異的なBRLF1、LMP2およびBRLF1/EBNA3A/EBNA3B/LMP2/BMLF1mixテトラマーを使用し、健康成人およびEBV感染が確認されている患者にてEBV感染細胞特異的CTLの同定を行った。6名中1名の健常者でCD8中の0.06%に特異的CTLが認められたが、他の5例では陰性であった。
CAEBV3例の解析では、1例でBRLF1がCD8中0.2%、1例では同じくBRLF1が0.45%の細胞に特異的なCTLとして検出された。他の1例では陰性であった。3例中1例のIMでもEBV-BRLF1特異的CTLの検出が可能であった。リアルタイムPCRで確実にEBVの感染が示されたCAEBV患者3例のうち、2例にBRLF1特異的CTLが証明され、1例には検出されなかった。これらのCTL誘導能は患者の予後とどのように関わるのかに興味が持たれた。
2.BV-LCLのペプチド刺激によるCTLの誘導
BRLF1特異的なペプチドを合成し、3μg/ml、10μg/ml、30μg/mlの3濃度で1x10^6/mlのB-LCLを処理し、人工的な抗原提示細胞とした。この処理の際、3μg/mlのβ2ミクログロブリンを共存させた。CD8細胞中のBRLF1テトラマー陽性の細胞は、3μ/mlのペプチドをパルスした時に1週目で0.04%、2週目で0.19%、3週目で0%と、2週目にピークを持つ陽性比率の上昇をみた。
3.CAEBV患者ペプチドパルス自己B-LCLによるEBV感染細胞特異的CTLの誘導
患者由来のEBV感染細胞特異的CTLの誘導は今の所出来ていない。治療上重要な意味を有することであり、今後、この実験系の再現性を確認しつつ、データを蓄積する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Application of HSVtk suicide gene to X-SCID gene therapy : Ganciclovir treatment offsets gene corrected X-SCID B cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama T, Kumaki S, Ishikawa Y, Onodera M, Sato M, Du W, Sasahara Y, Tanaka N, Sugamura K, Tsuchiya S
  • 雑誌名: BBRC 341 ページ: 391-398
• [雑誌論文] Phage ΦC31 integrase-mediated genomic integration of the common cytokine receptor gamma chain n human T-cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa Y, Tanaka N, Murakami K, Uchiyama T, Kumaki S, Tsuchiya S, Kugoh H, Oshima M, Calos MP, Sugamura K
  • 雑誌名: J Gene Med (In Press)
• [雑誌論文] A second-site mutation in the initiation codon of WAS (WASP) gene results in expansion of subsets of lymphocytes in an Wiskott-Aldrich Syndrome patient. (2006)
  • 著者名/発表者名: Du W, Kumaki S, Uchiyama S, Yachi A, Chung Yeng L, Kawai S, Minegishi M, Ramesh N, Geha RS, Sasahara Y, Tsuchiya S.
  • 雑誌名: Human Genet (In Press)
• [雑誌論文] A novel JAK3 mutation in a Japanese patient with severe combined immunodeficiency. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama T, Kumaki S, Fujiwara M, Nishida Y, Hakozaki I, Imai K, Du W, Yoshinari M, Sasahara Y, Tsuchiya S.
  • 雑誌名: Pediatr Int. 47 ページ: 575-578