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異種糖鎖Galα1-3Galβ1-4GlcNAc(Gal)とヒト血液型A抗原(GalNAcα1-3Fucα1-2Gal)を認識するB細胞の特性を解析した結果、特徴的なB細胞亜群であるB-1細胞(主として腹腔や胸腔内に存在し、脾臓に移行して抗体産生細胞となる)に属することが明らかとなった。B-1細胞はさらにそれぞれ特徴的なレパートリーを有するB-1a細胞(IgM^<high>CD11b^+CD5^+)とB-1b細胞(IgM^<high>CD11b^+CD5^-)に細分される。血液型抗原反応性B細胞はB-1a細胞に、Gal反応性B細胞はB-1b細胞に分類されることが解明された。カルシニューリン抑制剤サイクロスポリン(CyA)はB-0細胞からB-1細胞への分化を抑制することが報告されている。マウスを用いた我々の検討では、CyAは用量依存的にB-1a細胞の分化・増殖を抑制するが、B-1b細胞には影響を与えないことが判明した。従って、CyAはA糖鎖反応性B細胞への分化を抑制する。しかし、すでに成熟したA糖鎖反応性B細胞と抗体産生B細胞はCyA抵抗牲であるため、これらの選択的抑制が必要となった。
そこで、血液型A抗原認識成熟B細胞を選択的に標的するため、最適な親和性と特異性が得られる合成糖鎖を決定した。フローサイトメトリーで二単糖と三単糖の血液型A抗原を比較した場合、三単糖のものがより親和性および特異性が高かった。次に、標的成熟B細胞を傷害するトキシンとして異種蛋白bovine serum albumin(BSA)を血液型A三単糖に融合した(イムノトキシン)。マウスにBSA融合A三単糖を100μg/mouseで投与し、その6時間後に20倍希釈したウサギ抗BSA抗体を1ml/mouse投与した。その結果、血液型A抗原に結合し得るレセプターを表出するB細胞および抗A抗体(IgM)を産生するB細胞は選択的に消失した。ABO血液型不適合移植におけるB細胞性拒絶反応の臨床応用可能な予防および治療薬として、BSAと融合した合成A糖鎖の有用性が示唆された。
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