可逆性不死化ヒト膵島β細胞株による細胞療法の開発

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16390380
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 小林 直哉 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (10325102)
• 研究分担者: 藤原 俊義 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教授 (00304303) ; 香川 俊輔 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (00362971) ; 白川 靖博 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 医員 (60379774) ; 持立 克身 (独)国立環境研究所, 環境健康研究領域, 主任研究員 (20132863) ; 中路 修平 クラレメディカル株式会社, 新規事業開発部, 担当部長
• キーワード: レンチウイルスベクター / ヒトテロメラーゼ遺伝子 / インスリン分泌ヒト不死化株 / ブタ糖尿病モデル

研究概要

1.レンチウイルスベクターを用いたヒト膵島細胞への遺伝子導入を検討し、良好な遺伝子導入が可能であった。低コストで容易に大量培養が可能な、ヒト膵島細胞株を樹立するにあたり、遺伝子操作は重要なトールとなる。その目的にレンチウイルスベクターが有用であることが示唆された。
2.我々はヒト膵島細胞に注目し、ヒトテロメラーゼ遺伝子(hTERT、一対のloxP配列に挟まれているためCre/loxP反応にて除去できる)を組み換えレトロウイルスベクターを用いて導入することで、グルコース応答性を有するインスリン分泌ヒト不死化株NAKT-15の樹立に成功した。当該細胞は無限に増殖が可能である。NAKT-15細胞を糖尿病マウスの腎皮膜下に移植したところ、血糖値の正常化と生存率の有意な延長を認めた。
3.大型動物を用いてNAKT-15細胞の移植効果と安全性を検討するために、膵臓全摘によるブタ糖尿病モデルの作成に取り組み成功した。当該ブタは、糖尿病性ケトアシドーシスにて10目以内に全例死亡した。よって、NAKT-15細胞を移植することで糖尿病性ケトアシドーシスを予防できるか否か検討可能なモデルと言える。

研究成果

• [雑誌論文] Development of a porcine model of type 1 diabetes by total pancreatectomy and establishment of a glucose tolerance evaluation method. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kazuya Kobayashi
  • 雑誌名: Artificial Organs 28(11) ページ: 1035-1042
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Maintenance of glucose-sensitive insulin secretion of cryopreserved human islets with university of Wisconsin solution and ascorbic acid-2 glucoside. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takashi Arata
  • 雑誌名: Artificial Organs 28(6) ページ: 529-536
• [雑誌論文] Transduction of Human Islets With the Lentiviral Vector (2004)
  • 著者名/発表者名: Naoya Kobayashi
  • 雑誌名: Transplantation Proceedings 36 ページ: 2203-2204