| 研究課題/領域番号 |
16390427
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 研究機関 | 千葉大学 |
|---|
研究代表者 |
山崎 正志 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (50281712)
|
|---|
| 研究分担者 |
大河 昭彦 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (30312945)
吉永 勝訓 千葉大学, 医学部附属病院, 助教授 (30270870)
岡田 誠治 熊本大学, 大学院・医学研究部, 教授 (50282455)
|
|---|
| キーワード | 脊髄損傷 / 造血幹細胞 / 骨髄間質細胞 / 細胞移植 |
|---|
| 研究概要 |
[研究目的]
マウス脊髄不全損傷モデルに対する造血幹細胞(HSC)・骨髄間質細胞(BMSC)移植の治療効果を比較検討することを目的とした。
[方法]
1)マウス脊髄損傷モデルを作成。全身麻酔下にFarooque(2001)らの方法に準じて第8胸椎レベル20g5分間の圧迫を加え、脊髄不全損傷モデルとする。
2)Green Fluorescent Protein Transgenicマウス(GFP Tg)大腿骨より骨髄を採取し、FACS Vantage (Becton Dickinson)にてHSCを高度に濃縮。
3)GFP Tgマウス大腿骨より骨髄細胞を採取し、プラスチック培養皿にて付着性の細胞を培養する(BMSC)。
4)損傷後1週時に2)で採取したHSCまたは3)にて培養したBMSCを1)で作成した脊髄損傷モデルの脊髄損傷部に注入する。コントロールとして培養液のみを同量注入する。
5)細胞注入後時間経過を追って行動学的・組織学的評価を行い、HSC移植・BMSC移植・コントロールの3群間にて比較検討する。
[結果・考察]
HSC移植・BMSC移植群ともにコントロール群と比較して有意な後肢運動機能の改善が観察された。移植細胞の生着数はHSC移植群・BMSC移植群の間に有意な差は認められなかったが、HSC移植群のほうが移植細胞の頭・尾側への移動距離が大きい傾向を認めた。免疫染色では、HSC移植群においてGFP陽性移植細胞の一部がoligodendrocyteマーカーであるAPCを発現していた。一方、BMSC移植群ではGFP陽性移植細胞中に神経系マーカーを発現するものは認められず、その多くはBMSCマーカーのひとつfibronectin陽性だった。本研究の結果、HSC・BMSCの脊髄損傷に対する治療効果はほぼ同等であるといえた。免疫染色の結果から、HSCはごく一部だが神経系マーカーを発現するものが見られたのに対し、BMSCでは神経系マーカーは発現せずもともとの細胞マーカー陽性であった。このことはHSC・BMSCの損傷脊髄の機能回復メカニズムが異なる可能性を示唆している。
|
