| 研究課題/領域番号 |
16390496
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
眼科学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
吉村 長久 京都大学, 医学研究科, 教授 (70211662)
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| 研究分担者 |
鈴間 潔 京都大学, 医学研究科, 助手 (80335265)
片井 直達 信州大学, 医学部, 講師 (10260572)
高木 均 京都大学, 医学研究科, 講師 (70283596)
渋木 宏人 信州大学, 医学部, 助手 (70313864)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| キーワード | 未熟児網膜症 / 糖尿病網膜症 / 網膜血管新生 / クリスタリン / DNAマイクロアレイ / siRNA |
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| 研究概要 |
Smithらの方法に従い、網膜血管新生モデルマウスを作成し、経時的に神経網膜を採取し、Affimetrix社製Gene Chip MGU74 Av2とハイブリダイゼーションを行い、遺伝子発現の変化を検討した。このマイクロアレイには、12,448のcDNAとESTが含まれている。それらのうち、129個(1.03%)の遺伝子で2倍以上の発現の増減を認めた。発現増加が認められたのは49遺伝子あった。発現増加を認めた遺伝子の中で、βB2クリスタリンとαアクチンが生後12日目に一過性の上昇を示した。抗βB2クリスタリン抗体と抗αアクチン抗体を用いて、免疫組織化学的に2つのタンパクの局在を検討した結果、両者ともに、網膜新生血管を構成する血管内皮細胞を取り囲むように存在するグリア細胞に発現していることが分かった。次に、βB2クリスタリンに対する特異的なshort interfering RNA(siRNA)を合成し、RNA干渉実験によって網膜新生血管の発生が抑制されるかどうかを判定した。生後12日目、14日目、17日目にsiRNAを投与したところ、siRNAは、生後15日目、17日目の網膜におけるβB2クリスタリンの発現を抑制することが明らかとなった。また、網膜血管新生モデルマウスの血管新生が有意に抑制されることも分かった。増殖糖尿病網膜症手術時に得られた増殖膜におけるβB2クリスタリン発現を検討したところ、全例にその発現を認めた。HEK293細胞にβB2クリスタリン遺伝子をtransfectし、細胞の機能変化を観察したところ、βB2クリスタリン遺伝子の過剰発現によって細胞突起の進展が認められること、βB2クリスタリンとαアクチンは細胞膜直下に共存することが明らかとなった。以上の結果より、βB2クリスタリンが網膜新生血管の発生に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
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