| 研究課題/領域番号 |
16390578
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
外科系歯学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
本田 雅規 東京大学, 医科学研究所, 寄付研究部門教員 (70361623)
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| 研究分担者 |
朝比奈 泉 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30221039)
相良 洋 東京大学, 医科学研究所, 助手 (50145041)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2006
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| キーワード | アメロゲニン / エナメル質 / 歯胚 / 歯胚細胞 / 歯胚上皮細胞 / 組織工学 / 担体 / 培養 |
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| 研究概要 |
この研究において二つのことを新しく発見した。
1)歯胚中の3種類の細胞、歯胚上皮細胞、歯乳頭(歯髄細胞)および歯嚢細胞の培養条件を検討し、特に歯胚上皮細胞においては新しい培養方法を開発した。
鐘状期歯胚から無血清培地を用いて上皮細胞のみを選択し、3T3細胞をフィーダーレイヤーとして混合培養することで、長期培養に成功した。10継代した培養細胞のmRNAを採取し歯胚上皮系細胞特異的な遺伝子であるアメロジェニン、アメロブラスチン、エナメライシンの発現を確認し、前エナメル芽細胞の形質を維持していた。次に、歯乳頭(歯髄)組織中から幹細胞の特性を持つ細胞をFACSによって分離することに成功した。この細胞は従来、他の組織の幹細胞のマーカーとして報告されている遺伝子群を発現することを確認した。最後に、歯嚢組織から単細胞クローンの採取に成功し、その細胞を長期培養できる条件を見出した。また、その単細胞クローンは歯根膜の前駆細胞の特性を示すことがmRNAによるRT-PCRの解析から確認した。さらに、この単細胞クローンを歯根膜細胞に有利に分化する培養条件を見出した。
2)培養歯胚上皮細胞がin vivoにてエナメル質形成能を持つことがわかった。
3-5継代した培養歯胚上皮細胞と同時期の歯乳頭細胞をコラーゲンスポンジの担体の上で混合させて、免疫不全ヌードラットの腹部大網中に移植する。移植後4週・8週にて試料を採取して、組織学的および免疫組織化学的に評価したところ、移植後4週にて取り出した試料にエナメル質の形成が観察できた。この組織はサイトケラチン14抗体に陽性であり、アメロゲニン抗体陽性のエナメル芽細胞が観察できた。これらの結果から、われわれが開発した培養方法にて培養・増殖させた歯胚上皮細胞はアメロゲニンのタンパクを分泌し、歯髄細胞と混合させることでエナメル質を形成することがわかった。
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