| 研究課題/領域番号 |
16390601
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
高橋 信博 東北大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (60183852)
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| 研究分担者 |
真柳 秀昭 東北大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (60005098)
野田 忠 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00013970)
畑 眞二 東北大学, 病院・講師 (20208507)
佐藤 拓一 東北大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (10303132)
松山 順子 新潟大学, 医歯学系, 助手 (30293236)
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| キーワード | DNAチップ / 16S ribosomal RNA / DNAプローブ / DNAプライマー / 口腔細菌 |
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| 研究概要 |
本年度は、DNAチップの実用化と、それを用いた口腔細菌叢プロファイリングを試みた。さらに、口腔細菌叢と口腔疾患に関する最新の知見から、DNAチップに搭載する検出対象微生物種の整理を行った。また、昨年度に引き続き、DNAチップに関する特許取得の準備を共同研究企業とともに進めた。
1.口腔細菌叢プロファイリング用DNAチップの実用化の検討:
昨年度作成した24種口腔微生物特異的プローブを搭載したプロトタイプDNAチップを用いて、個々の微生物種検出を試みた。その際、最良の検出状態を得るためにハイブリダイゼーション反応条件を種々検討した。その結果、本DNAチップの検出感度は極めて高いこと、さらに、スポットの濃淡からある程度の定量性が期待されることが明らかになった。
2.DNAチップによる口腔細菌叢プロファイリングの試み:
実際の口腔試料(プラーク)を用いてDNAチップによる口腔細菌叢プロファイリングを試みた。その結果、スポットの有無でプロファイリングが可能であることが分かった。さらに、この口腔試料を、微生物特異的プローブを用いたnested PCR及びreal-time PCRで解析したところ、ほぼDNAチップで得られた結果と一致していることが確認された。
3.口腔微生物特異的プローブの更新:
最新の口腔細菌叢と口腔疾患に関する知見から、DNAチップに新たな微生物種を追加する必要性が生じ、昨年度の方法を用いて新たなプローブを作成しトータル40微生物種とした。さらに40種を「う蝕〜歯内疾患〜口腔感染症関連微生物」「歯周病関連微生物」の2群に大別し、DNAチップ上のプローブ配列を工夫した。
4.口腔細菌叢プロファイリング用DNAチップに関する特許取得の準備を共同研究企業とともに進めた。
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