| 研究概要 |
本年度は歯周炎局所よりT細胞クローンを樹立し、遺伝子発現を検討した。歯周炎患者より歯周外科処置時に歯肉組織を採取し、酵素処理と比重遠心法で単核細胞を分離した。末梢血からも同様に単核細胞を分離し、Alloフィーダー細胞存在下で抗CD3抗体とIL-2を加えて限界希釈法によりT細胞クローンを樹立した。3名の歯周炎患者から歯肉T細胞クローン57個、末梢血T細胞クローン101個についてRT-PCR法によりCD25,CTLA-4,FOXP3,IFN-γ,IL-4,IL-10,TGF-β1,IL-17,RANKLのmRNA発現を検討した。また、T細胞クローンのmRNA発現が歯肉局所におけるmRNA発現を反映しているかどうかを調べるために歯周外科処置時に得られた組織から直接RNAを抽出してRT-PCR法を行った。歯肉組織、末梢血それぞれから樹立されたT細胞クローンのほとんどがCD4陽性であった。歯肉由来T細胞クローンではそれらのすべてでCD25、CTLA-4、TGF-β1のmRNAが検出された。一方、末梢血由来のT細胞クローンではIFN-γとTGF-β1 mRNAの発現率が100%であった。IL-4 mRNA発現は歯肉由来のT細胞クローンにおいて末梢血由来T細胞クローンより陽性率が低かったが、CD4+CD25+制御性T細胞のマスター遺伝子と考えられているFOXP3と抑制性サイトカインであるIL-10の発現率は歯肉由来のT細胞クローンで高かった。歯肉サンプルのIL-4 mRNA陽性率は歯肉T細胞クローンの陽性率と比較して低かった他はmRNA発現の割合に大きな違いはなかった。以上より、抗CD3とIL-2による非特異的方法により樹立されたT細胞クローンは炎症歯肉組織の病態を反映した集団であることが示唆された。
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