| 研究概要 |
本研究の目的は内皮由来弛緩因子の一つである内皮由来過分極因子(EDHF)に関与する分子群をクローニングして、EDHF反応の作用機構を解明することであった。
まず、EDHF反応に関与すると考えられる、Ca^<2+>-activated K^+ channel(SK1,SK2,SK3,IK, BK)をcloningした。RT-PCRや各チャネルの阻害薬などによる検討の結果から、EDHF反応にはSK3,IKが関与する可能性があると考えられた。動脈に過剰発現させるため、SK3,IKをアデノウイルスに組み込みSK3,IK発現ウイルスを作成した。腸間膜動脈を単離し、DMEM中で器官培養を行うとEDHF反応は、培養とともに減弱した。SK3を組み込んだアデノウイルスを投与するとSK3は投与2-7日後に、主に内皮細胞に発現した。SK3の過剰発現により、EDHF反応が増加する傾向が認められた。
EDHF反応は、ギャップジャンクションの阻害薬で抑制された。EDHF反応に関与するコネキシン(CX)を検討したところ、CX37,CX40,CX43,CX45が候補遺伝子として同定された。CX40は内皮細胞に、また、CX43は内皮と平滑筋に発現していた。各遺伝子をアデノウイルスに入れて、過剰発現させて、EDHF反応の変化を検討したところ、EDHF反応がやや増強する傾向が認められた。全体的に、器官培養とともにEDHF反応が減弱するため、様々な条件を試みたが、EDHF反応を保つ条件を見いだすのは困難であった。In vivoでの検討が課題として残った。
また、EDHFと病態についても検討した。ラット卵巣を摘出によりエストロゲンを減少させると、血管におけるCX43,CX40の発現が低下し、EDHF反応が低下することが判明した。
以上の結果より、EDHF反応にSK3,IK, CX40,43が関与することが推定された。
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