| 研究課題/領域番号 |
16510032
|
|---|
| 研究機関 | 千葉大学 |
|---|
研究代表者 |
鈴木 信夫 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (90111426)
|
|---|
| 研究分担者 |
喜多 和子 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (80302545)
鈴木 敏和 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (70270527)
菅谷 茂 千葉大学, 医学部, 教務職員 (90334177)
|
|---|
| キーワード | 突然変異 / ヒト細胞 / 血清 / シャペロン / DNA修復 / SUMO-3 / X線 / 酸化ストレス |
|---|
| 研究概要 |
本研究では、細胞の放射線応答・変異誘導調節に関して、シャペロン・SUMO・プロテアーゼネットワークという新規のシグナル伝達メカニズムを提唱し、次の研究成果を得た。
細胞内メジエーター分子の検証:細胞内のシャペロン分子について、以下のような知見を得た。
1.X線照射後のプロテアーゼ活性を指標に精製されるシャペロン分子GRP94を同定した。このGRP94siRNA処理ヒト細胞において、X線照射によるコロニー形成能が著しく低下し、GRP94のX線致死抵抗化への関与が示唆された。2.プロテアーゼ活性を指標に精製される他の分子としてHSP27タンパクが同定された。このHSP27遺伝子のアンチセンスDNA導入ヒト細胞では、チミンダイマーと(6-4)光産物の除去能の低下が見られ、紫外線致死感受性化した。GST融合HSP27タンパクを作製し、結合タンパクを検索した結果、複数のタンパク質分子に対する結合能が紫外線照射後に変化した。3.また、変異誘導調節に関わる因子として、GRP78/Bip遺伝子が同定され、GRP78/Bip遺伝子アンチセンスDNA導入ヒト細胞では、紫外線に対し感受性となった。プラスミドDNA基質を含むCell-free systemを用いた再構成実験のシステムから、NER修復系に関与することが示された。4.さらに、細胞内修飾タンパクであるSUMOタンパクについては、X線照射後のDNA合成代謝に関わることが示唆された。また、GFPとSUMO-3の結合タンパクを細胞で一過的に発現させると、X線照射後核内でドット状にフォーカスが形成されることが見出された。
ヒト個体レベルでの酸化ストレス度の測定:ストレスによるヒト個体の酸化障害物代謝の指標として、ヒドロペルオキシド産物の測定を行った。ある種の疾患患者や重喫煙者では、体内のヒドロペルオキシド産物の量が増大することが示された。
|
