| 研究概要 |
平成16年度に引き続き,mRNAに修飾ヌクレオシドを導入したものを無細胞タンパク質合成系で翻訳することで,原核生物tRNAのアンチコドン一字目に見られる5位修飾ウリジンの3位が脱プロトン化しているか,調べる研究を遂行した.平成16年度に開発したT4 RNAリガーゼ2を用いたRNA連結法で実際にRNAを調製して,タンパク質合成を行ったところ,この酵素で連結したRNAが全く翻訳されないことを発見した.おそらく,連結されたRNAが,3'-5'ではなく,2'-5'結合でつながっているものと考えられ,そうだとすると,T4ファージにおける本酵素の役割についての重要な知見であると考えられた.しかし,この件については,本研究の主旨から離れるので,それ以上の追究は行わなかった.一方,従来から,別の研究費で研究していたコムギ胚芽由来RNAリガーゼを用いて,効率よく正確にRNAを連結することが可能であることがわかったので,当該酵素をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて大量調製した.さらに,平成16年度のイノシンに続いて,6-チオグアノシンを特異的に効率よくRNAに導入することができることがわかった.6-チオグアノシンの導入はイノシンのそれよりも高効率であった.一方,キサントシンについては全く導入できないことがわかった.6-チオグアノシンについては,そのヌクレオシド三リン酸を酵素的に効率よく合成する方法を開発した.
一方で,従来の作業仮説をさらに一般化した理論を構築し,第4回国際核酸化学シンポジウムで発表した.これについては,現在,Journal of Theoretical Biology誌に投稿中であり,修正稿の審査中である.
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