| 研究概要 |
我々は、ユビキチン付加酵素(UBE2E2)のbinding partnerとしてRING-fingerタンパク質RNF8をクローニングし,このRNF8がレチノイドX受容体と相互作用することを明らかにしてきた。さらにスペインのグループとの共同研究で以下のことを明らかにした。
ユビキチン付加酵素のUBC13をbaitとしたyeast two-hybrid assay を行い、variant E2のUEV、及び数種のRING-fingerタンパク質をコードするcDNAをクローニングした。UEVはUBC13とヘテロ2量体を形成し、ユビキチンの通常のLys48(K48)ではなくK63を介してイソペプチド結合を形成することが知られている。K48を介したユビキチン化はタンパク分解に至るが、K63を介したユビキチン化の意義は十分解明されていない。また、RING-fingerタンパク質としては、RNF8、KIAA00675、CHFR、KF1及びZNRF2をクローニングした。これらRING-fingerタンパク質は、いずれもUBE2E2と相互作用した。
一方、ユビキチンのK29,K48,K63のいずれがRNF8のポリユビキチン化に関与するかについてユビキチンのKR変異体を用いて調べた。野生型ユビキチン(UbWT)、UbK48,63R、UbK29,63R、及びUbK29,48Rを用いてRNF8の自己ユビキチン化を調べたところ、いずれのユビキチン変異体でもポリユビキチンのラダーが観察された。さらに、UBC13のdominant-negative変異体であるUBC13-C87A変異体をUbK29,48Rと共に発現させると、RNF8のユビキチン化が亢進した。この結果は、UBC13を介したRNF8のユビキチン化がユビキチンのK63を介したものであり、従来のK48を介したものではないことを示している。
|
