| 研究課題/領域番号 |
16570113
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
渡辺 琢夫 金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (40303268)
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| 研究分担者 |
米倉 秀人 金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (80240373)
山本 靖彦 金沢大学, 医学系研究科, 助手 (20313637)
山本 博 金沢大学, 医学系研究科, 教授 (00115198)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| キーワード | RAGE / AGE / 細胞内情報伝達 / チロシンリン酸化 / 共受容体 |
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| 研究概要 |
本研究は、糖尿病血管症などの病態に重要な細胞表面受容体RAGE(receptor for advanced glycation endproducts)により活性化される細胞内シグナルの解析を通してRAGEによるシグナル生成機構を明らかにすることを目指し、当初計画に沿って遂行され、以下の成果を得た。
(1)全長型RAGE発現細胞と、細胞内ドメイン欠失RAGE発現細胞をAGEによって刺激した所、全長型RAGE発現細胞でのみチロシンリン酸化が亢進するタンパク質が複数同定された。その一部は、新たなRAGE依存性チロシンリン酸化タンパク質と考えられたため、質量分析により数個の候補タンパク質を同定した。
(2)各種の酵素阻害剤を用い、これらのタンパク質のチロシンリン酸化はERKの上流もしくは別個のシグナル伝達経路に位置し、チロシンホスファターゼによる制御を受けているものがあることを明らかにした。
(3)RAGE発現細胞をAGEで刺激後、クロスリンカーにより細胞表面上で隣接しているタンパク質同士を架橋し、抗RAGE抗体で免疫沈降を行った。次に還元剤処理によりクロスリンカー分子内のジスルフィド結合を切断した後、ウェスタンブロットによりチロシンリン酸化タンパク質を検出した。その結果、複数のチロシンリン酸化タンパク質がRAGEと複合体を形成してることが示された。
(4)上記チロシンリン酸化タンパク質の一部はAGE刺激によりチロシンリン酸化が亢進し、刺激時間依存性およびAGE濃度依存性が認められた。また、(1)で同定されたタンパク質と一致する分子量を示すものもあった。
(5)全長型RAGE、またはを細胞内ドメイン欠失RAGEを発現している細胞をAGEで刺激後、既知チロシンキナーゼ型受容体のチロシンリン酸化をアッセイする抗体アレイで解析したところ、AGE刺激依存性にチロシンリン酸化が亢進する受容体が見出された。
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