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真核細胞のゲノムDNAの複製は、各染色体上に複数存在する特定の領域(DNA複製起点)から開始する。G1期には、ゲノムDNAの複製起点上には複製前複合体(pre-RC)と呼ばれるタンパク-DNA複合体が形成され、細胞にDNA複製能を与える。S期にはこのpre-RCが2つのキナーゼ、CDK(サイクリン依存性キナーゼ)とCdc7により活性化され、その詳細は未だ明らかではないものの、pre-RCの消失と新たなタンパクの結合、さらにはDNA2本鎖の開裂と複製フォークの形成が起こり、DNA複製が開始すると考えられる。この過程におけるCDKの生理的ターゲットとして、最近Sld2が報告された。しかし、我々の最新の解析結果は、Sld2以外にも必須のCDKターゲットが存在することを示唆しており、本研究ではこの事実を確認するとともに、未知のCDKのターゲットを同定し、DNA複製開始の制御機構を解明することを目指している。本年度はCDKの必須な基質であるSld2の活性型変異体を作製し、CDK活性がなくても複製フォークの形成とそれに続くDNA合成がおきるかどうかを調べたところ、これまでに得られていた予備的な結果通り、この活性型変異だけでは、DNA複製を開始できないことがわかった。このことから、Sld2以外にもS期開始に必要なCDKの基質があると結論し、このsld2活性化型変異を用いて、この変異と合成致死となる変異のスクリーニングを行った。その結果、これまでに複製フォークで働くと考えられている複数の因子の変異体が得られた。しかしながら、これまでに得られた変異のほとんどは、S期進行に欠損を示し、CDK活性なしでも顕著なDNA複製を行うようなものではなかった。現在、引き続きスクリーニングを継続するとともに、得られた変異の詳細な解析も同時に行っている。
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