研究課題
基盤研究(C)
上皮細胞への分化過程における、細胞内膜系によるシグナル統合制御の実体とそれを支えるメカニズムを明らかにする事を目的として、上皮系細胞の未だ数の限られているポストゴルジ細胞内膜系マーカー分子の、FL-REX (fluorescence localization-based retrovirus-mediated expression cloning)法による探索・同定を進めた。極性上皮細胞から抽出したmRNAをもとにGFP-cDNA融合ライブラリ}を構築し、MDCK細胞に発現させ、ポストゴルジ細胞内膜系様の局在を示す細胞をクローン化した。得られたクローンから、PCRによりGFP融合cDNAを回収して、配列を解析したところ、ポストゴルジ細胞内膜系への局在が知られている既知の蛋白質、既知であるがこれまでポストゴルジ系への局在の知られていなかった蛋白質、そして、いくつかの機能局在とも未知の新規蛋白質をさらに同定した。これらの局在未知であったタンパク質分子の中には、細胞増殖などのシグナル伝達に関連の深いものが含まれ、膜系への局在の意味が注目される。また、この過程で、特定の膜系に様々なGFP融合蛋白質を安定に発現するMDCK細胞群を得た。これらの細胞などを用いて得られた分子の解析を進め、その分布の上皮細胞膜系での局在の特徴、動態が明らかとなってきた。現在、これらの分子、細胞をマーカーとしてもちいて本研究に利用し、上皮細胞のシグナル変換における膜系の解析をさらに進めている。また、機能解析ツールとしてこれらの分子を利用するために、上記の発現細胞を利用して、いくつかの分子についてRNA interference法によるノックダウン手法を確立した。
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