| 研究概要 |
サブグループIに属するキュウリモザイクウイルス(CMV)のY系統とサブグループIIに属してタバコへの病原性が極めて弱いYN分離株および病原性の強いB21分離株を利用して、2bタンパク質の病原性決定部位とRNAサイレンシング抑制能との関連を明らかにする目的で、Y系統とYN分離株間のキメラ2b遺伝子をアセンブリーPCR法で構築した.6種類のキメラ2b遺伝子と親としたYおよびYN2b遺伝子をCMV-YRNA2の2b遺伝子欠損cDNAクローンに導入し,それらの転写RNA2をRNA1とRNA3とともにタバコに接種して病徴を比較したところ,Y2bタンパグ質のN末端から30番から39番目までの領域が2bタンパク質のタバコへの病原性と関連が認められた.以上から、Y系統の2bタンパク質を中心にN末端側領域に変異を導入した。作成した変異2b遺伝子シリーズを2b欠損RNA2に再導入して変異2bの病原性を判定し、GFP発現コンストラクトともに変異2b発現コンストラクトをアグロインフィルトレーション法でNicotiana benthamiana葉に注入して変異2bRNAのサイレンシング抑制能を検定した。その結果サブグループ間で保存されているN末端側領域内の39番目から47番目までのアミノ酸配列内(KSPSERARS)の変異が病原性とRNAサイレンシング抑制能に大きな影響を与えることを明らかにした。特に、39番目の塩基性のリジンを酸性のグルタミン酸に置換すると明瞭な病原性の低下とRNAサイレンシング抑制能の低下を示し、リン酸化を受けると推定される40番目のセリンをリン酸化されないアラニンに置換しても病原性やRNAサイレンシング抑制能は低下しないことが示された。これらから、40番目のセリンがリン酸化されることで病原性およびRNAサイレンシング抑制能が低下すると推察された。
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