| 研究概要 |
胃腺粘液細胞は,GlcNAcα1,4Galβ-Rを非還元末端に有する糖鎖を含むムチンを分泌している.最近,これらのムチンがHelicobacter pyloriに対する抗菌活性を有することが報告された.しかしながら,これまでに生体からGlcNAcα1,4Galβ-Rを生合成するα4GnTを精製した報告はない.そこで,我々はウマα4GnTの精製を行いその諸性質を明らかにした.
ウマ血清を80%飽和硫安沈殿および各種クロマトグラフィーに供しα4GnT活性を約5,300倍にまで精製した.精製α4GnTの至適温度および至適pHは,37℃,pH7であった.本酵素は,UDP-GlcNAcを供与体基質として,Galβ1,3GalNAcα-pNP,Galβ-pNP,Galβ1,4GlcNAcβ-pNP,Galβ1,3GalNAcβ-pNP,Galβ1,3GlcNAcβ-pNPのGal残基のOH-4にαGlcNAc残基を転移する反応を触媒した.本酵素は,ムチン型糖鎖のコア1構造であるGalβ1,3GalNAcα-pNPに対して最も効率よくαGlcNAc残基を転移した.
さらに,ウマα4GnTのクローニングを試みた.ウマ胃腺部組織より抽出したトータルRNAから,オリゴ(dT)プライマーを用いた逆転転写反応によりcDNAを合成した.ヒトを含む他の動物種のα4GnTのアミノ酸配列を元に設計したディジェネレイトプライマーによるPCRを行った.得られたPCR産物は,アガロース電気泳動において単一のバンド示したので,ターミネーター標識法により塩基配列を決定した.予想されるウマα4GnTのアミノ酸配列は,ヒトのアミノ酸配列と約85%の相同性を有していた.
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