再生医療を目指した基礎的研究:正常ヒト胎児肝細胞の分化と薬物動態試験への応用

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16590109
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 医療系薬学
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 松永 民秀 信州大学, 医学部附属病院, 助教授 (40209581)
• 研究分担者: 大森 栄 信州大学, 医学部附属病院, 教授 (70169069)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• キーワード: ヒト胎児肝細胞 / シトクロムP450 / デキサメタゾン / グルココルチコイド受容体 / CYP3A4 / CYP3A7 / リファンピシン / RNA干渉法

研究概要

正常ヒト胎児肝細胞(HFL細胞)にCYP3A4、CYP3A5およびCYP3A7のmRNAの発現が認められた。HFL細胞においてCYP3Aはデキサメタゾン(DEX)により顕著に誘導されるが、成人の肝細胞とは異なりリファンピシン(RIF)による誘導は全く認められなかった。平面培養においてHFL細胞におけるCYP3A4 mRNAの発現は、各種副腎ステロイド(10nM)によって誘導され、その強度は糖質コルチコイド作用(抗炎症力価)に対し高い相関性が認められた。CYP3A7においてもトリアムシノロン、ベタメタゾン及びデキサメタゾン(DEX)により強く誘導された。DEXによるCYP3Asの誘導は、100μMよりもむしろ100nMにおいていずれも強く誘導された。また、DEX(100nM)によるCYP3Asの誘導は、グルココルチコイド受容体(GR)アンタゴニストであるRU-486(5μM)で顕著に抑制された。成人の肝細胞でCYP3Asの誘導に関与することが報告されているヒトプレグナンX受容体及びヒトコンスティテューティブアンドロスタン受容体のmRNAの発現は、HFL細胞において検出することは出来なかった。一方、GRの発現はいずれの処理においても確認され、その発現量に変動は認められなかった。RNA干渉法によりGRを約40%ノックダウンした場合、DEXによるCYP3A4及びCYP3A7の誘導は、それぞれ30%、50%の発現量の減少が見られた。以上の結果より、移植先の環境が細胞分化に影響することが推察された。さらに、HFL細胞において副腎ステロイドによるCYP3Aの誘導は主にGRを介する経路によることが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Determination of P-glycoprotein ATPase activity using luciferase. (2006)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Biol Pharm Bull 29 ページ: 560-564
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Effective NADH-Dependent Oxidation of 7β-Hydroxy-Δ^8-tetrahydrocannabinol to the Corresponding Ketone by Japanese Monkey Hepatic Microsomes (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Biol Pharm Bull 28 ページ: 646-651
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Characterization of Human Fetal Hepatocytes : Expression and Induction of CYP3As (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Proceedings of the 15^<th> Intl. Symposium on MDO ページ: 99-102
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Induction mechanisms of CYP3As in human fetal hepatocytes by glucocorticoids. (2005)
  • 著者名/発表者名: Maruyama M et al.
  • 雑誌名: Drug Metab Rev 37 ページ: 147
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Simple and highly sensitive method for determination of P-glycoprotein ATPase activity using Luciferase. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohmori S et al.
  • 雑誌名: Drug Metab Rev 37 ページ: 176
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expressions of cytochrome P450 in differentiating mouse embryonic stem cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Drug Metab Rev 37 ページ: 200
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Effective NADH-Dependent Oxidation of 7β-Hydroxy-Δ^8-tetrahydrocannabinol to the Corresponding Ketone by Japanese Monkey Hepatic Microsomes. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Biol Pharm Bull 28 ページ: 646-651
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Induction mechanisms of CYP3As in human fetal hepatocytes by glucocorticoids. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Drug Metab Rev 37 ページ: 147
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Expression and induction of CYP3As in human fetal hepatocytes. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 318 ページ: 428-434
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Characterization of Human Fetal Hepatocytes : Expression and Induction of CYP3As. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T et al.
  • 雑誌名: Proceedings of the 15^<th> Intl.Symposium on MDO (Medimond S.r.l., Bologna, Italy) ページ: 99-102
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より