新規リゾフォスファチジン酸受容体の機能解析

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16590219
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 石井 聡 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (10300815)
• キーワード: リゾフォスファチジン酸 / LPA / LPA4 / p2y9 / GPR23 / 受容体

研究概要

データベースよりヒトLPA_4受容体(別名p2y9/GPR23)と相同性が高い(98.1%)マウスオルソログをPCRでクローニングした。このDNAを発現ベクターに組み込み、内在性LPA受容体を持たないRH7777細胞に一過性発現させた。この細胞を破砕後、超遠心により膜画分を調製した。この膜画分をトリチウムラベルした1-オレオイル-LPAと結合させ、今回得られたマウスオルソログがLPAと特異的に結合することを確認した(Kd=31.3nM, Bmax=59.5pmol/mgタンパク質)。
マウスLPA_4受容体mRNAの発現分布を解析するために、マウス各種臓器から抽出したポリ(A^+)RNAをノーザンハイブリダイゼーションで解析した。その結果、雄性生殖器の精巣ではほとんど発現が認められなかったのとは対照的に、卵巣、子宮、胎盤など雌性生殖器での発現が高いことが明らかになった。一方、発生期の脳に焦点を絞ってマウスLPA_4受容体mRNAの発現の時期的な変化をE12以降で調べたところ、E12での発現が最も高く、それ以降は日を追う毎に急激に発現レベルが低下しくことが明らかになった。
ペプチド抗原をもとにしてマウスLPA_4受容体に対するウサギポリクローナル抗体を作製した。これを用いて組織化学的解析を行う予定である。
LPA_4受容体欠損マウスを作製するためのターゲティングベクターを、マウスゲノムDNAのBACライブラリーをもとに作製した。現在、相同組換えを起こしたES細胞をスクリーニング中である。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of T cell death-associated gene 8 (TDAG8) as a novel acid sensing G-protein coupled receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ishii, S., Kihara, Y., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Biol.Chem. 280 ページ: 9083-9087
• [雑誌論文] Stimulation of erythrocyte ceramide formation by platelet activating factor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Lang, P.A., Kempe, D.S., Tanneur, V., Eisele, K., Klarl, B.A., Myssina, S., Jendrossek, V., Ishii, S., Shimizu, T., Waidmann, M., Hessler, G., Huber, S.M., Lang, F., Wieder, T.
  • 雑誌名: J.Cell Sci. 118 ページ: 1233-1243
• [雑誌論文] Platelet activating factor receptor deficient mice have an improved host defense against pneumococcal pneumonia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Rijneveld, A.W., Weijer, S., Florquin, S., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • 雑誌名: J.Infect.Dis. 189 ページ: 711-716
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Dyslipidemia associated with atherosclerotic disease systemically alters dendritic cell mobilization. (2004)
  • 著者名/発表者名: Angeli, V., Llodra, J., Rong, J.X., Satoh, K., Ishii, S., Shimizu, T., Fisher, E.A., Randolph, G.J.
  • 雑誌名: Immunity 21 ページ: 561-574
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Platelet-activating factor receptor deficient mice show an unaltered clearance of Haemophilus influenzae from their respiratory tract. (2004)
  • 著者名/発表者名: Branger, J., Wieland, C.W., Florquin, S., Maris, N.A., Pater, J.M., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • 雑誌名: Shock 22 ページ: 543-547
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Trophic signals acting via phosphaidylinositol-3 kinase are required for normal pre-implantation mouse embryo development. (2004)
  • 著者名/発表者名: Lu, P., Chandrakanthan, V., Cahana, A., Ishii, S., O'Neill, C.
  • 雑誌名: J.Cell Sci. 117 ページ: 1567-1576
• [雑誌論文] Platelet-activating factor receptor develops airway hyperresponsiveness independently of airway inflammation in a murine asthma model. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ishii, S., Nagase, T., Shindou, H., Takizawa, H., Ouchi, Y., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Immunol. 172 ページ: 7095-7102
• [雑誌論文] Absence of platelet-activating factor receptor protects mice from osteoporosis following ovariectomy. (2004)
  • 著者名/発表者名: Hikiji, H., Ishii, S., Shindou, H., Takato, T., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Clin.Invest. 114 ページ: 85-93