| 研究概要 |
Trypanosoma brucei(Tb)の14-3-3蛋白質について,2つのアイソタイプI, IIのcDNAをクローンしていたが,それらはそれぞれヒトの14-3-3蛋白質(9つのアイソタイプがある)のうちτとアミノ酸配列上,47,50の相同性があった。N末から順にα1〜α9のα-helixの部分があり,その部分の保存性を始めとして,重要と思われるドメイン構造の部分とか,親・疎水性の性質についても保存されていた。I, IIいずれも,Tb細胞内に1〜2×10^6分子が発現されており,我々が開発したプラスミドベクターpQuadraを利用してRNAiによるノックダウンをすると,血流型(BS)もプロサイクリック型(PC)も変形し増殖できなくなった。ノックダウンの影響はPCよりBSFに早期に現れ,複数の核やキネトプラスト,そして鞭毛を有する虫体が集積して,細胞分裂が遂行されないと考えられた。細胞形態と分裂の進む経過を詳細に解析した。それにより核でのG2-M移行,細胞でのM-G1移行が阻害されている結果を得た。またTbの運動や分裂機構にも関係している結果を得た。protein phosphataseとの関連からみると,その阻害剤であるオカダ酸添加の効果よりも14-3-3ノックダウン効果の方が大である。そのことからすると,protein phosphatase以外にもこの変化に関連した経路などを考慮する必要が生じた。
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