志賀毒素が血管内皮を傷害する分子機構の網羅的検討

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16590374
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 吉田 友昭 愛知医科大学, 医学部, 助教授 (70210705)
• キーワード: 志賀毒素 / Two hybrid法 / 細胞内輸送 / アポトーシス / 蛋白相互作用

研究概要

志賀毒素の活性サブユニットは、宿主細胞にエンドサイトーシスされた後、細胞内のTrans Golgi networkで蛋白分解酵素の作用を受けて活性化されて、Golgi stackを経て細胞質に移行し、リボゾームでの蛋白合成を阻害することによって細胞毒性を発揮することが知られている。しかしながら、その細胞内での輸送メカニズムなどは不明な点が多い。平成16年度には、志賀毒素の活性サブユニットが相互作用をする細胞内タンパク質を、大腸菌をホストとしたtwo hybrid法で網羅的に検索し、small glutamine-rich tetratricopeptide repeat containing-α(SGT)という蛋白と相互作用する可能性が示された。この分子は、細胞質で、細胞骨格や成長ホルモンレセプターの細胞内ドメインと相互作用して、細胞分裂やエンドサイトーシスに関わることが示唆されている分子である。平成17年度は、この分子に対するsiRNAを、我々独自の実験系である、ヒト血管内皮の初代培養系に移入してその発現を抑制した状態で毒素を作用させると、細胞傷害活性が抑制されることが確認された。また、網羅的な蛋白相互作用検索の結果は、SGTと毒素の活性サブユニットのみを大腸菌に発現させたtwo hybrid法で確認できたが、一方で、毒素活性サブユニットがホスト細胞内において蛋白分解酵素で処理された後の分子は、SGTとの相互作用は確認できず、毒素が細胞へ取り込まれた後、Trans Golgi networkに達するプロセスにSGTが関与していることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Lethal endotoxic shock using alpha-galactosylceramide sensitization as a new experimental model of septic shock. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito H, Koide N, Hassan F, Islam S, Tumurkhuu G, Mori I, Yoshida T, Kakumu S, Moriwaki H, Yokochi T.
  • 雑誌名: Lab Invest. 86 ページ: 254-61.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Chlamydia pneumoniae infection enhances lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor (LOX-1) expression on human endothelial cells (2006)
  • 著者名/発表者名: Yoshida T, Koide N, Mori I, Ito H, Yokochi T
  • 雑誌名: FEMS Microbiol.Let. (In press)
• [雑誌論文] Lipopolysaccharide prevents apoptosis induced by brefeldin A, an endoplasmic reticulum stress agent, in RAW 264.7 cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Islam S, Hassan F, Tumurkhuu G, Ito H, Koide N, Mori I, Yoshida T, Yokochi T.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 340 ページ: 589-596
• [雑誌論文] A quantitative analysis of cedar pollen-specific immunoglobulins in nasal lavage supported the local production of specific IgE, not of specific IgG. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshida T, Usui A, Kusumi T, Inafuku S, Sugiyama T, Koide N, Yokochi T.
  • 雑誌名: Microbiol Immunol. 49 ページ: 529-34.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より