| 研究概要 |
C型肝炎ウイルス(HCV)の部分RNAゲノム自己複製単位(レプリコン)が複製している細胞(レプリコン細胞)を用いて,細胞性因子を含めた複製複合体の構造とそれぞれの構成因子のHCVゲノム複製反応における機能を解析することによりHCVゲノム複製機構を分子レベルで明らかにすることを目的として研究をおこなった。本年度、既に我々の研究室で見いだしているこのレプリコンRNA複製を抑制する薬剤の作用機序解析することから、複製複合体の構造ならびに形成機構を解析する試みをおこなった。まず、その一つサイクロスポリンA(CsA)の作用機序については、siRNAを用いた細胞内遺伝子発現抑制実験からその標的因子であるサイクロフィリン(CyP)ファミリー分子の中でCyPBが実際の標的になっていることを明らかにした。さらにCyPBのレプリコンRNA複製への関与のメカニズムに関する解析を進め、CyPBはHCVタンパク質の中のRNA複製酵素であるNS5Bと結合することでNS5BのRNA結合能を上昇させる働きがあることを明らかにした。CyPBはこのNS5Bと類似した細胞内局在を示す事から、CyPBがHCVゲノム複製複合体に含まれる可能性が推定された。また我々はMAPキナーゼシグナル系阻害剤であるPD98059がレプリコン細胞内においてのレプリコンRNAの複製を著しく亢進することを見出した。そのメカニズムの解析をすすめたところ、PD98059処理によりレプリコン細胞内のHCVタンパク質量が上昇することを見いだした。HCVレプリコンRNAならびにHCVゲノムからのタンパク質発現には内部リボソーム挿入配列(IRES)による翻訳システムが機能していることが知られているため、PD98059のIRESに対する効果を検討したところ、PD98059処理によりHCV RNAに存在するIRES依存的な翻訳活性が上昇することがわかった。このことからPD98059によるHCVゲノム複製活性の亢進機構の少なくとも一つはHCVゲノムのIRESを介した翻訳活性の上昇であることが示唆された。翻訳活性以外のHCV複製複合体への影響に関して現在解析を進めている。
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