申請者はこれまでの研究で、遺伝子工学的に変異を導入した一連の変異ウイルスを用いて、パッケージング能及びウイルス粒子内ゲノムRNA二量体化への変異の及ぼす影響を、今までにない明瞭さで分析する極めて独創的な系を開発・確立することに成功している。HIV-1ゲノム上のパッケージングシグナル領域はゲノムの5'末端に位置し、一本鎖RNAが形成する7つのステム-ループ構造からなる。これらはすべてRNAパッケージング能への関与が指摘されており、ゲノム二量体化の機能領域も同様の場所にあると考えられている。申請者は既にこの領域の様々な変異体を作成して、独自の系を用いてパッケージング能及びゲノムRNA二量体化に及ぼす影響を検討した結果、二つの機能の支配領域には必要条件の不一致が見られた。このように二つの現象は分離しうるという新しい可能性が示唆されたことから、さらに解析を進めることで引き続き新しい知見が見いだされることが期待された。そして様々な領域への詳細な変異導入を行うことにより、まずは粒子内ゲノム二量体化を起こさせるのに必要最低限の範囲をHIV-1ゲノム上で特定することに成功した。 HIVのRNP解析については、精製したウイルス粒子よりネイティブなRNPを単離・精製し、ウイルス抗原や宿主細胞由来の含有物の分析を行い、また、構造生物学的解析に供することが可能となる純度と量を得ることを目指している。ウイルス粒子よりコアを分離する方法として最近提唱されたSpin-Thru法に着目し、界面活性剤の種類や濃度、また密度勾配の条件検討を行った。その結果、界面活性剤をCHAPSに変えることで逆転写酵素やNCといったRNP構成要素のみが存在する分画が単離される可能性を見いだした。
|