EBウイルスの潜伏感染時と溶解感染時におけるEBNA1の機能解析

2006 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16590398
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 富山大学 (2006); 愛知県がんセンター(研究所) (2004-2005)
• 研究代表者: 大黒 徹 富山大学, 医学薬学研究部ウイルス学, 助教授 (80291409)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2006
• キーワード: EBV / EBNA1 / ChIP / Replication compartments

研究概要

EBウイルス(EBV)のコードするEBNA1はEBV潜伏感染細胞でEBVゲノムのエピゾーム状態での維持や細胞が分裂する際の分配に機能することが知られている。EBNA1蛋白質は潜伏感染時の複製開始点であるoriPのFRやDS領域、およびQプロモーター領域(QP)に結合することは、これまでin vitroフットプリンティングの実験でのみ報告されているが、in vivoでそれらの結合性は実証されていなかった。また溶解感染時にもEBNA1蛋白質は発現しているが機能や動態については不明な点が多い。今回我々はEBNA1が結合しているEBVゲノム上の領域を網羅的に検索するため染色体免疫沈降(ChlP)法の改良を行い、EBV感染細胞で¢EBNA1のEBVゲノムへの結合動態を細胞周期、溶解感染誘導時について解析した。染色体免疫沈降(ChIP)法でin vivoでもEBNA1蛋白質が潜伏感染時にoriP領域に結合していることを確認したが、細胞周期での結合量の変化はみられなかった。
また共焦点レーザー顕微鏡を用いてEBNA1蛋白質の細胞内局在性を検討した結果、潜伏感染時は核内に拡都して小さなドット状に分布したが、溶解感染の誘導によりreplication compartmentsに局在することがわかった。EBVのコードするBMRF1産物(DNAポリメラーゼ不随蛋白質)は複製の場に広く分布していたがEBNA1蛋白質はそれらの近傍に一部重なるように局在していた。これらの結果からEBNA1はEBVの溶解感染時にもウイルスゲノム複製の場に局在していることが予想され、EBNA1蛋白質は合成されたEBVゲノムDNAのoriP領域に結合することによってreplication compartmentsに繋ぎ止める働きを持つ可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-MCM6-MCM7 complex during Epstein-Barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ayumi Kudoh
  • 雑誌名: Journal of Virology Volume 80・No 20 ページ: 10064-10072
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Establishment of a novel foreign gene delivery system combining an HSV amplicon with an attenuated replication-competent virus, HSV-1 HF10 (2006)
  • 著者名/発表者名: Lumin Zhang
  • 雑誌名: Journal of Virological Methods Volume 137・No 2 ページ: 177-183
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Postreplicative mismatch repair factors are recruited to Epstein-Barr virus replication compartments (2006)
  • 著者名/発表者名: Tohru Daikoku
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry Volume 281・No 16 ページ: 11422-11430
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] EBVの潜伏感染と再活性化機構 (2006)
  • 著者名/発表者名: 大黒 徹
  • 雑誌名: ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩- 64巻・増刊号3 ページ: 584-588
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-MCM6-MCM7 complex during Epstein-Barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kudoh A, Daikoku T, Ishimi Y, Kawaguchi Y, Shirata N, Iwahori S, Isomura H, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Virology. 80(20) ページ: 10064-10072
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Establishment of a novel foreign gene delivery system combining an HSV amplicon with an attenuated replication-competent virus, HSV-1 HF10. (2006)
  • 著者名/発表者名: Zhang L, Daikoku T, Ohtake K, Ohtsuka J, Nawa A, Kudoh A, Iwahori S, Isomura H, Nishiyama Y, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Virological Methods. 137(2) ページ: 177-1
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Postreplicative mismatch repair factors are recruited to Epstein-Barr virus replication compartments. (2006)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T, Kudoh A, Sugaya Y, Iwahori S, Shirata N, Isomura H, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry. 21;281(16) ページ: 11422-11430
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Latent infection and reactivation of Epstein-Barr virus (2006)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T
  • 雑誌名: Nippon Rinsho 64 Suppl ページ: 3:584-588
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Two Spl/Sp3 binding sites in the major immediate-early proximal enhancer of human cytomegalovirus have a significant role in viral replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Hiroki Isomura
  • 雑誌名: Journal of Virology Volume 79・No 15 ページ: 9597-9607
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Activation of ataxia telangiectasia-mutated DNA damage checkpoint signal transduction elicited by herpes simplex virus infection (2005)
  • 著者名/発表者名: Noriko Shirata
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry Volume 280・No 34 ページ: 30336-30341
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Architecture of replication compartments formed during Epstein-Barr virus lytic replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Tohru Daikoku
  • 雑誌名: Journal of Virology Volume 79・No 6 ページ: 3409-3418
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus lytic replication elicits ATM checkpoint signal transduction while providing an S-phase-like cellular environment. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ayumi Kudoh
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry Volume 280・No 9 ページ: 8156-8163
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Two Sp1/Sp3 binding sites in the major immediate-early proximal enhancer of human cytomegalovirus have a significant role in viral replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Isomura H, Stinski MF, Kudoh A, Daikoku T, Shirata N, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Virology. 79(15) ページ: 9597-9607
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Activation of ataxia telangiectasia-mutated DNA damage checkpoint signal transduction elicited by herpes simplex virus infection. (2005)
  • 著者名/発表者名: Shirata N, Kudoh A, Daikoku T, Tatsumi Y, Fujita M, Kiyono T, Sugaya Y, Isomura H, Ishizaki K, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry. 26;280(34) ページ: 30336-30341
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Architecture of replication compartments formed during Epstein-Barr virus lytic replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T, Kudoh A, Fujita M, Sugaya Y, Isomura H, Shirata N, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Virology. 79(6) ページ: 3409-3418
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus lytic replication elicits ATM checkpoint signal transduction while providing an S-phase-like cellular environment. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kudoh A, Fujita M, Zhang L, Shirata N, Daikoku T, Sugaya Y, Isomura H, Nishiyama Y, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry. 4;280(9) ページ: 8156-8163
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] In vivo dynamics of EBNA1-oriP interaction during latent and lytic replication of Epstein-Barr virus. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tohru Daikoku
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry Volume 279・ No 52 ページ: 54817-54825
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of S-phase cyclin-dependent kinase activity blocks expression of Epstein-Barr virus immediate-early and early genes, preventing viral lytic replication. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ayumi Kudoh
  • 雑誌名: Journal of Virology Volume 78・No 1 ページ: 104-115
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] In vivo dynamics of EBNA1-oriP interaction during latent and lytic replication of Epstein-Barr virus. (2004)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T, Kudoh A, Fujita M, Sugaya Y, Isomura H, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry. 24;279(52) ページ: 54817-54825
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of S-phase cyclin-dependent kinase activity blocks expression of Epstein-Barr virus immediate-early and early genes, preventing viral lytic replication. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kudoh A, Daikoku T, Sugaya Y, Isomura H, Fujita M, Kiyono T, Nishiyama Y, Tsurumi T.
  • 雑誌名: Journal of Virology. 78(1) ページ: 104-115
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より