新しい腫瘍関連抗原MK-1の癌の診断および治療における意義の解析

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16590468
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• 研究分担者: 黒木 求 福岡大学, 医学部, 講師 (10131822) ; 芝口 浩智 福岡大学, 医学部, 助手 (60295061)
• キーワード: 腫瘍関連抗原 / MK-1 / 17-1A / Ep-CAM / イムノアッセイ / ヒトモノクローナル抗体 / CDC / ADCC

研究概要

MK-1抗原は、本医学部で発見した腫瘍関連抗原であるが、17-1A、KSA、Ep-CAMあるいはGA773-2抗原等とも呼ばれる糖タンパクであることも明らかとなってきた。MK-1は、多くの上皮系癌細胞表面で発現が著しく増加する腫瘍関連抗原であり、この抗原に対するマウスモノクローナル抗体(mouse monoclonal antibody; MmAb)は大腸癌の治療にも利用され始めている。我々はこれまで、MK-1に対するMmAbを作製し、さらにその遺伝子を用いてマウス/ヒトキメラ抗体や単鎖抗体(single-chain variable fragmented antibody: scFv)抗体を作製し、in vitroにおける研究や担癌マウスを利用したin vivoでの実験で、癌の治療に有用であることを示してきた。
本研究で我々は、ヒト抗体遺伝子を含む染色体を導入したKMマウスを用い、MK-1抗原に対する完全なヒトモノクローナル抗体(human monoclonal antibody: HmAb)を作製した。MK-1は、カイコ幼虫に発現させ、体液より精製した組み換えMK-1タンパクを用いた。MK-1抗原で免疫したKMマウスの脾細胞とマウスミエローマ細胞P3-U1をPEGで融合させ、ELISAにより抗MK-1抗体産生ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。得られたクローンの産生するHmAbをヌードマウス腹水より精製し、その性状を解析した。抗MK-1 HmAbの抗腫瘍効果は、MK-1を発現しているヒトの胃癌細胞であるMKN-74細胞を標的としたin vitroでの補体依存性細胞障害活性(complement-dependent cytotoxicity: CDC)と抗体依存性細胞障害活性(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity: ADCC)により調べた。約2000個のハイブリドーマクローンをELISAによりスクリーニングした結果、約100個のMK-1反応性クローンが得られた。それらのほとんどはIgM抗体で、IgG抗体は2個のIgG4サブクラスが得られた。それらはどちらもMK-1のN端部分と反応することがわかった。IgGのHmAbは、MKN-74に対するCDC活性は示さなかったが、有意なADCC活性を示した。またIgMであるHmAbはCDC活性を示した。以上の結果から、今回新規に作製したMK-1に対するヒト型抗体とその単鎖抗体scFvは、癌の抗体療法に極めて有用であると考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] 癌関連抗原MK-1に特異的なヒトモノクローナル抗体の作製 (2005)
  • 著者名/発表者名: 黒木 求, 山田博美, 芝口浩智, ほか
  • 雑誌名: 日本分子腫瘍マーカー研究会誌 20-1 ページ: 44-45
• [雑誌論文] Preparation of human IgG and IgM monoclonal antibodies for MK-1/Ep-CAM by using human immunoglobulin gene-transferred mouse and gene cloning of their variable regions (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki, Mo., Yamada, H., Shibaguchi, H., Hachimine, K., Hirose, Y., et al.
  • 雑誌名: Anticancer Research 25-6A ページ: 3733-3739
• [雑誌論文] Prevention of acute lung allograft rejection in rat by the Janus kinase 3 inhibitor. tyrphostin AG490 (2005)
  • 著者名/発表者名: Higuchi, T., Shiraishi, T., Hirayama, S., Shibaguchi, H., Kuroki, Mo., et al.
  • 雑誌名: Journal of Heart and Lung Transplantation 24・10 ページ: 1557-1564
• [雑誌論文] 癌の抗体療法 (2005)
  • 著者名/発表者名: 黒木 求, 黒木政秀
  • 雑誌名: Biotherapy 19・2 ページ: 125-132
• [雑誌論文] Targeting of cancer gene therapy with antibodies or their genes against tumor-associated antigens (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki, Ma., Shibaguchi, H., Kuroki, Mo., Kinugasa, T., Hachimine, K., et al.
  • 雑誌名: Gene Therapy and Molecular Biology 9-A ページ: 107-112
• [雑誌論文] Re-targeting of cytotoxic T lymphocytes and/or natural killer cells to CEA-expressing tumor cells with anti-CEA antibody activity (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki, Ma., Hachimine, K., Huang J., Shibaguchi, H., Kinugasa, T., et al.
  • 雑誌名: Anticancer Research 25・6A ページ: 3725-3732