新しい腫瘍関連抗原MK-1の癌の診断および治療における意義の解析

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16590468
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• 研究分担者: 黒木 求 福岡大学, 医学部, 講師 (10131822) ; 芝口 浩智 福岡大学, 医学部, 助手 (60295061)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• キーワード: 腫瘍関連抗原 / MK-1 / 17-1A / Ep-CAM / イムノアッセイ / ヒトモノクローナル抗体 / CDC / ADCC

研究概要

MK-1抗原(別名:17-1A、KSA、GA773-2あるいはEp-CAM)は、本医学部で発見した糖タンパク質性の腫瘍関連抗原である。MK-1は、多くの上皮系癌細胞表面で発現が著しく増加する腫瘍関連抗原であり、この抗原に対するマウスモノクローナル抗体(mouse monoclonal antibody ; MmAb)は大腸癌の治療にも利用され始めている。我々はこれまで、MK-1に対するMmAbを作製し、さらにその遺伝子を用いてマウス/ヒトキメラ抗体や単鎖抗体(single-chain variable fragmented antibody : scFv)抗体を作製し、in vitroにおける解析や担癌マウスを用いたin vivoでの実験で、癌の治療に有用であることを示してきた。
本研究で我々は、ヒト抗体遺伝子を含む染色体を導入したKMマウスを用い、MK-1抗原に対する完全なヒトモノクローナル抗体(human monoclonal antibody : HmAb)を作製した。MK-1は、カイコ幼虫に発現させ、体液より精製した組み換えMK-1タンパクを用いた。MK-1抗原で免疫したKMマウスの脾細胞とマウスミエローマ細胞P3-U1をPEGで融合させ、ELISAにより抗MK-1抗体産生ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。得られたクローンの産生するHmAbをヌードマウス腹水より精製し、その性状を解析した。抗MK-1 HmAbの抗腫瘍効果は、MK-1を発現しているヒトの胃癌細胞であるMKN-74細胞を標的としたin vitroでの補体依存性細胞障害活性(complement-dependent cytotoxicity : CDC)と抗体依存性細胞障害活性(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity : ADCC)により調べた。約2000個のハイブリドーマクローンをELISAによりスクリーニングした結果、約100個のMK-1反応性クローンが得られた。それらのほとんどはIgM抗体で、IgG抗体は2個のIgG4サブクラスが得られた。それらはどちらもMK-1のN端部分と反応することがわかった。IgGのHmAbは、MKN-74に対するCDC活性は示さなかったが、有意なADCC活性を示した。またIgMであるHmAbはCDC活性を示した。以上の結果から、今回新規に作製したMK-1に対するヒト型抗体とその単鎖抗体single-chain variable fragmented antibody(scFv)は、癌の抗体療法に有用であることが示唆された.

研究成果

• [雑誌論文] Preparation of human IgG and 1gM monoclonal antibodies for MK-l/Ep-CAM by using human immunoglobulin gene-transferred mouse and gene cloning of their variable recions (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M, Yamada H, Shibaguchi H, Hachimine K, Hirose Y, et a!.
  • 雑誌名: Anticancer Research 25・6 ページ: 3733-3739
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Targeting of cancer gene therapy with antibodies or their genes against tumor-associated antigens (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M, Shibaguchi H, Kuroki M, Kinugasa T, Hachimine K, et a!.
  • 雑誌名: Gene Therapy and Molecular Biology 9・A ページ: 107-112
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Preparation of human IgG and IgM monoclonal antibodies for MK-1/Ep-CAM by using human immunoglobulin gene-transferred mouse and gene cloning of their variable regions (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M, Yamada H, Shibaguchi H, Hachimine K, Hirose Y, et al.
  • 雑誌名: Anticancer Research 25-6 ページ: 3733-3739
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Targeting of cancer gene therapy with antibodies or their genes against tumor-associated antigens (2005)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M, Shibaguchi H, Kuroki M, Kinugasa T, Hachimine K, et al.
  • 雑誌名: Gene Therapy and Molecular Biology 9-A ページ: 107-112
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Strategies to endow cytotoxic T lymphocytes or natural killer cells with antibody activity against carcinoembryonic antigen (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroki, M, Kuroki M, Shibaguchi H, Badran A, Hachimine K, et a!.
  • 雑誌名: Tumor Biology 25・4 ページ: 208-216
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] KMマウスによるヒト抗体作製-抗CEA抗体を中心として- (2004)
  • 著者名/発表者名: 黒木政秀, 黒木 求, 芝口浩智
  • 雑誌名: 分子細胞治療 3・4 ページ: 435-441
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Generation and targeting of human tumor-specific Tcl and Thl cells ttansduced with a lentivirus containing a chimeric immunoglobulin T-cell receptor (2004)
  • 著者名/発表者名: Gyobu H, Tsuji T, Suzuki Y, Ohkuri T, Chamoto K, Kuroki M, et a!.
  • 雑誌名: Cancer Research 64・4 ページ: 1490-1495
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Generation, immunologic characterization and antitumor effects of human monoclonal antibodies for carcinoembryonic antigen (2004)
  • 著者名/発表者名: Imakiire T, Kuroki M, Shibaguchi H, Abe H, Yarnauchi Y, Ueno A, et al.
  • 雑誌名: International Journal of Cancer 108・4 ページ: 564-570
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Strategies to endow cytotoxic T lymphocytes or natural killer cells with antibody activity against carcinoembryonic antigen (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroki, M, Kuroki M, Shibaguchi H, Badran A, Hachimine K, et al.
  • 雑誌名: Tumor Biology 25-4 ページ: 208-216
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Preparation of human monoclonal antibodies by using the KM mouse (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuorki M, Kuroki M, Shibaguchi H
  • 雑誌名: Cellular and Molecular Medicine 3-4 ページ: 435-441
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Generation and targeting of human tumor-specific Tc1 and Th1 cells transduced with a lentivirus containing a chimeric immunoglobulin T-cell receptor (2004)
  • 著者名/発表者名: Gyobu H, Tsuji T, Suzuki Y, Ohkuri T, Chamoto K, Kuroki M, et al.
  • 雑誌名: Cancer Research 64-4 ページ: 1490-1495
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Generation, immunologic characterization and antitumor effects of human monoclonal antibodies for carcinoembryonic antigen (2004)
  • 著者名/発表者名: Imakiire T, Kuroki M, Shibaguchi H, Abe H, Yamauchi Y, Ueno A, et al.
  • 雑誌名: International Journal of Cancer 108-4 ページ: 564-570
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Gene therapy in cancer via use of a retrovector having a tumor specificity and expressing inducble nitric oxide synthase. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology, Nitric Oxide Protocols, (Humana Press, Totowa (USA)) Vol.279 ページ: 201-211
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [図書] Methods in Molecular Biology (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M
  • 総ページ数: 246
  • 出版者: Humana Press (Totowa, NJ, USA)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より