| 研究課題/領域番号 |
16590581
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
柿沼 晴 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助手 (30372444)
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| 研究分担者 |
坂本 直哉 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助手 (10334418)
荒昭 昭博 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助手 (80361690)
渡辺 守 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
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| キーワード | ヒト臍帯血由来細胞 / 肝細胞 / アルブミン / 細胞移植 / CD45 / linege marker / NOD / SCIDマウス / 肝幹細胞 |
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| 研究概要 |
我々は当該研究において、ヒト臍帯血由来細胞(UCB cells)を用いて、表面抗原によって分取した臍帯血由来細胞を肝障害モデル動物に移植することで、臍帯血由来肝幹細胞を同定し、さらに高純度に分取した肝幹細胞を機能的肝細胞に分化誘導して移植に用いる方法を開発する研究を行い、今年度の成果として下記を得た。1.ヒト臍帯血由来・肝幹細胞の同定:まず、CD45、CD34、c-metなどの細胞表面抗原を用いて、cell sorterで臍帯血細胞を分取し、これをUCB cellsからアルブミン産生能・アンモニア代謝能を有する肝細胞が誘導されうるFGF-1、FGF-2、HGF、SCF、LIFを添加した培養系で培養した。その結果、CD45陽性細胞、Lineage marker陰性細胞からアルブミンを発現する細胞を得た。またその画分を追求した結果、高純度に分取したCD34陽性細胞のみを培養しても、アルブミン陽性細胞が誘導されうることを見いだしたの結果より、これらの画分の細胞を肝障害マウスに移植する実験を行い下記の結果を得た。2.移植マウスの解析:マウス肝及び血清におけるヒト特異的遺伝子・蛋白発現を検出することによって、移植マウスに臍帯血由来細胞が生着したか否かを評価した。その結果、CD45陽性細胞、Lineage marker陰性細胞のみを移植しても臍帯血由来肝細胞が出現することを見いだした。3.新規移植モデルの開発:NOD/SCIDマウスに肝障害を与えて移植する新規の動物モデルの開発に着手した。Retrorsin前処理+CCI4連続投与モデルにおいて、従来の2-AAF/PHモデルに比べて生着率が高くなり、今後の解析にfeedbackすることとした。
これらの結果に基づいて、今後はCD34陽性・陰性細胞画分を新規開発した移植モデルに移植することによって、肝幹細胞の細胞生物学的解析を進めてゆく予定である。
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