レプリコンを用いたC型肝炎ウイルスNS5A蛋白の抗インターフェロン機構解析

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16590583
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 北原 史章 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (50303409)
• 研究分担者: 榎本 信幸 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 教授 (20251530) ; 坂本 穣 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (60324191)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / レプリコン / インターフェロン / インターフェロン誘導遺伝子 / NS5A蛋白

研究概要

●インターフェロンによる抗HCV Replicon効果の解析
siRNA(small interfering RNA)によるインターフェロンeffector蛋白のknock down解析
siRNAは二本鎖RNAによる遺伝子サイレンシング技術であり、細胞内で全く毒性を示さずに標的遺伝子発現を制御することができる。当研究室においてはすでにsiRNA技術は導入済みであり、HCVゲノムの特定部位に対するsiRNAを作成し、HCV repliconの増殖抑制効果を確認している。
この技術により平成15年度の研究で同定された抗HCV作用を有するインターフェロンeffector蛋白の発現を遮断し、インターフェロンによる抗HCV replicon効果が実際に当該遺伝子を介していることを確認した。具体的には抗HCV replicon効果を示す、GBP-1、IFI-6-16、IFI-27の発現抑制によりHCV増殖が亢進することを明らかとした。
●NS5A蛋白の抗インターフェロン作用の解析
インターフェロンによる抗HCV Replicon効果に対するNS5A蛋白の作用の解析
臨床的にインターフェロン抵抗性および感受性を示すHCVより同定したNS5A-ISDRのアミノ酸変異をHCV replicon遺伝子に導入、in vitroでのHCV増殖能とそれぞれのアミノ酸変異との関連を解析した。その結果、臨床的なインターフェロン感受性とHCV増殖能との間には密接な関連のあることが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR) modulate hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi T, Maekawa S, Sakamoto N, Watanabe H, Tanabe Y, Chen C-H, Nakagawa M, Kakinuma S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazawa N, Tanabe Y, Koyama T, Takeda Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Sekine Y, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press