腹膜中皮細胞へのinterleukin-10導入を応用した消化器癌遺伝子治療

2006 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16590617
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 大阪市立大学
• 研究代表者: 富永 和作 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (80336768)
• 研究分担者: 樋口 和秀 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (20218697) ; 藤原 靖弘 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (40285292) ; 渡邊 俊雄 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (50336773)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2006
• キーワード: 腹膜中皮細胞 / interleukin 10 / 消化器癌 / 遺伝子治療 / 腹膜播種転移

研究概要

腹膜中皮細胞の初代培養系の確立・遺伝子導入効率の検討
7週令Wistar系雄性ラットを用い、腹膜中皮細胞の初代培養系を確立した。またβ-galactosidase発現adenovirus vector(Ad-LacZ)を用い、遺伝子導入効率について検討した。その結果、胃癌細胞株MKN45細胞に比較し、ラット腹膜中皮細胞へは約10.9倍と高い遺伝子導入を認めた。
腹膜中皮細胞を標的としたInterleukin-10遺伝子導入によるマウス胃癌腹膜播種抑制
5週令BALB/c系ヌードマウスに対し、MKN45細胞を腹腔内投与し胃癌腹膜播種モデルを作成した。その3日後にIL-10遺伝子組み換えadenovirus(Ad-mlL-10)、Ad-LacZ、コントロールとしてPBSの腹腔内投与を施行し、以下の結果を得た。
1.adenovirus投与1、3週後の腹膜において、X-gal染色性がびまん性に認められ、腹膜中皮細胞は遺伝子導入標的として有用だと考えられた。
2.1、3週後の腹腔洗浄液IL-10濃度は、それぞれ3431±1378、4665±2859pg/mlと上昇し、5、7週では98±176、117±104pg/mlと大幅に減少していた。すなわち少なくとも3週間は、腹腔内で高濃度のIL-10産生が維持されることが判明した。
3.血清IL-10濃度は腹腔洗浄液の約1/13と低く、全身性の副作用出現も認められなかった。
4.Ad-mlL-10群にて、腸間膜腫瘍結節数は、3、5週後ともにAd-LacZ群に比し有意に抑制されており、経時的な体重減少からの回復、生存期間の延長が認められた。その機序には、結節内血管新生抑制を介したものであることも判明した。
以上より、腹膜中皮細胞を導入標的としたIL-10遺伝子療法は、腹腔内で高濃度のIL-10産生を維持し、胃癌腹膜播種を抑制する可能性が示唆された。上記の結果をH19年4月American Association for Cancer Research Annual Meetingですでに発表し、H19年5月Digestive Diseases Weeksの国際学会にて発表する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Growth inhibition of colon cancer cells by transfection of dominant-negative apoptosis signal-regulating kinase-1 (2007)
  • 著者名/発表者名: Kuwamura H, Tominaga K et al.
  • 雑誌名: Oncol Rep 17(4) ページ: 781-786
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Comparison of gastrointestinal symptoms and psychological factors of functional dyspepsia to peptic ulcer or panic disorder patients. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tominaga K, Higuchi K et al.
  • 雑誌名: Inflammopharmacology 15(2) ページ: 84-89
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Growth inhibition of colon cancer cells by transfection of dominant-negative apoptosis signal-regulating kinase-1. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kuwamura H, Tominaaa K, Shiota M, Ashida R, Nakao T, Sasaki E, Watanabe T, Fujiwara Y, Oshitani N, Higuchi K, Ichijo H, Arakawa T, lwao H.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 17(4) ページ: 781-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Comparison of gastrointestinal symptoms and psychological factors of functional dyspepsia to peptic ulcer or panic disorder patients. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tominaaa K, Higuchi K, Iketani T, Ochi M, Kadouchi K, Tanigawa T, Shiba M, Watanabe T, Fujiwara Y, Oshitani N, Nagata T, Kiriike N, Arakawa T.
  • 雑誌名: Inflammopharmacology. 15(2) ページ: 84-9
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Roles of cyclooxygenase 2 and microsomal prostaglandin E synthase 1 in rat acid reflux oesophagitis. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hayakawa T, Fujiwara Y et al.
  • 雑誌名: Gut 55(4) ページ: 450-456
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Roles of cyclooxygenase 2 and microsomal prostaglandin E synthase 1 in rat acid reflux oesophagitis. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hayakawa T, Fujiwara Y, Hamaguchi M, Sugawa T, Okuyama M, Sasaki E, Watanabe T, Tominaaa k, Oshitani N, Higuchi K, Arakawa T.
  • 雑誌名: Gutt. 55(4) ページ: 450-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Correlation of MAP kinases with COX-2 induction differs between MKN45 and HT29 cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tominaga K, Higuchi K et al.
  • 雑誌名: Aliment Pharmacol Ther 20, Suppl 1 ページ: 143-150
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Monocyte chemotactic protein-1 regulates leukocyte recruitment during gastric ulcer recurrence induced by tumor necrosis factor-alpha. (2004)
  • 著者名/発表者名: Watanabe T, Higuchi K et al.
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 287(4) ページ: G919-928
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Dominant-negative mutant of c-Jun gene transfer : a novel therapeutic strategy for colorectal cancer. (2004)
  • 著者名/発表者名: Suto R, Tominaga K et al.
  • 雑誌名: Gene Ther 11(2) ページ: 187-193
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Correlation of MAP kinases with COX-2; induction differs between MKN45 and HT29 cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tominaaa K, Higuchi K, Sasaki E, Suto R, Watanabe T, Fujiwara Y, Oshitani N, Matsumoto T, Kim S, lwao H, Arakawa T.
  • 雑誌名: Aliment Pharmacol Ther. 20 Suppl 1 ページ: 143-50
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Monocyte chemotactic protein-1 regulates leukocyte recruitment during gastric ulcer recurrence induced by tumor necrosis factor-alpha. (2004)
  • 著者名/発表者名: Watanabe T, Higuchi K, Hamaguchi M, Shiba M, Tominaga K, Fujiwara Y, Matsumoto T, Arakawa T.
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287(4) ページ: G919-28
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Dominant-negative mutant of c-Jun gene transfer : a novel therapeutic strategy for colorectal cancer. (2004)
  • 著者名/発表者名: Suto R, Tominaaa K, Mizuguchi H, Sasaki E, Higuchi K, Kim S, lwao H, Arakawa T.
  • 雑誌名: Gene Ther. 11(2) ページ: 187-93
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より