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HCVは感染すると持続感染化し、慢性肝炎から肝細胞癌を発症する。その治療はインターフェロンとリバビリン以外にないが、その効果はいまだ不十分である。培養細胞によるHCVの良いウイルス培養系が無いことが新たな治療法の開発の妨げになってきた。これまでにない高い効率で培養細胞において複製可能なJFH-1株を用いて、ウイルスRNA複製系およびウイルス感染系を確立し、その機構を解析し、新たな抗ウイルス戦略の構築に供することが本研究の目的である。
HCVの全長ウイルスゲノムをもつレプリコン構築の作製
JFH-1株の全長ウイルスゲノムにネオマイシン耐性遺伝子を挿入したレプリコン構築を作製した。
HCVの全長ウイルスゲノムをもつレプリコンの複製増殖
作製したレプリコンの構築から試験管内でRNAを合成して培養細胞に導入した。G418による選択培養を行いレプリコン複製細胞を得た。レプリコンRNAの複製を解析した。さらに、培養上清中のウイルス粒子形成を同定した。このレプリコンウイルス粒子を含む培養上清を新たな細胞に感染させることが可能であった。
HCVRNA複製に関与するウイルス側因子の同定
HCV株のウイルス遺伝子領域を組み換えることによりウイルスRNA複製効率に影響するウイルス遺伝子領域を解析したところ、NS3、NS5Bから3'X領域が重要であることを見いだした。今後さらにこのウイルス遺伝子領域がコードするウイルス蛋白質の酵素活性について検討して行く。
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