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Endostatin(ED)は18型コラーゲンのC末端断片であり、血管内皮細胞に対する強い増殖抑制効果を有する。ED受容体は血管内皮細胞に特異的に発現するといわれていたが、我々の現在までの研究の結果、マウスの非小細胞肺癌細胞株(LLC)上には未知のED受容体が存在することが示唆された。そこで本研究においては、A)LLC上に発現が示唆されるED受容体を同定した後、機能解析を行い、また、B)そのED結合ドメインを明らかにすることで肺癌細胞に結合せず、より血管内皮細胞の増殖能を特異的かつ強力に抑制するED断片(ED/frag)を作成することを目的とした。本研究の初年度である平成16年度には、目的AであるLLC上に発現が予想されるED受容体の同定と機能解析を行い、1)integrin a5が機能的ED受容体であること、また2)EDがa5受容体を介しLLCに結合することで、LLCの細胞増殖抑制や、vitronectinに対する遊走活性の阻害効果を生じることをも明らかにした。本研究の最終年度である平成17年度は、さらにEDがa5を介してLLCと結合することで、1)アポトーシスが誘導され、2)focal adhesion kinaseがリン酸化されることを明らかにした。一方、目的BであるED融合蛋白作成は、当初、大腸菌によるEDのGST-融合蛋白作成を試みたが不溶性のため断念し、現在、手法を酵母であるPichia株発現システムに変更し全長ED融合蛋白を作成中である。その後、EDの機能ドメインごとの融合蛋白を作成する予定である。
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