特発性血小板減少性紫斑病におけるT細胞エピトープの同定と新たな免疫療法の開発

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16590942
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 羽藤 高明 愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (30172943)
• 研究分担者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 教授 (60127917)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• キーワード: 血小板 / 特発性血小板減少性紫斑病 / GPIIb-IIIa / T細胞 / 自己免疫 / インテグリン / エピトープ

研究概要

本研究の目的は、ITP患者からGPIIbペプチドに反応するT細胞クローンを分離し、ITPにおけるGPIIb反応性T細胞の役割とドミナントエピトープを明らかにすることである。われわれは、ITP患者からGPIIb由来ペプチド(#429-443)を特異的に認識するHLA-DR^*0405拘束性CD4陽性T細胞株を樹立した。このT細胞は血小板を自己樹状細胞に取り込ませて抗原提示させた系においても細胞増殖反応とサイトカイン産生を示したことから、GPIIb#429-443が自己反応性T細胞エピトープとなりうることを証明した。この手法を用いて複数のITP患者からGPIIb反応性T細胞を分離することができた。また、ヘルパー活性を評価するために必要となる抗GPIIb抗体産生量の測定法として、抗GPIIb-IIIaモノクローナル抗体を用いた高感度ELISA測定系を確立した。ついで、GPIIb反応性T細胞の機能解析を行ったところ、ヘルパー活性を有するCD4陽性T細胞だけでなく、一部のITP患者には細胞障害活性を有するGPIIb反応性CD8陽性T細胞が存在していた。また、GPIIb-IIIaの機能解析を遺伝子組み換え蛋白を用いてすすめた結果、リガンド結合に重要なアミノ酸とGPIIb-IIIaの活性化を抑制しているアミノ酸配列を同定した。また、CD4陽性T細胞の機能解析のために、WT1に対するCD4陽性T細胞クローンを樹立して、その機能を解析したところ、このクローンはHLAクラスII抗原拘束性にWT1陽性白血病細胞に対して細胞障害活性を示した。また、CD4陽性T細胞とCD8陽性T細胞のパーフォリン遺伝子の発現を比較したところ、CD8陽性T細胞ではパーフォリン遺伝子の恒常的発現がみられるのに対して、CD4陽性T細胞では細胞の活性化依存性に発現することが明らかになった。

研究成果

• [雑誌論文] Direct recognition and lysis of leukemia cells by WT1-specific CD4^+ T lymphocytes in an HLA class II-restricted manner. (2005)
  • 著者名/発表者名: Guo Y et al.
  • 雑誌名: Blood 106・4 ページ: 1415-1418
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Patients with platelet dysfunction characterized by transient and reversible aggregation in response to ADP despite normal collagen-induced aggregation. (2005)
  • 著者名/発表者名: Iijima K et al.
  • 雑誌名: American Journal of Hematology 80・2 ページ: 167-168
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Novel RUNX1-PRDM16 fusion transcripts in a patient with acute myeloid leukemia showing t(1;21)(p36;q22). (2005)
  • 著者名/発表者名: Sakai I et al.
  • 雑誌名: Genes, Chromosomes & Cancer. 44・3 ページ: 265-270
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Differential regulation of perforin expression in human CD4+ and CD8+ cytotoxic T lymphocytes. (2005)
  • 著者名/発表者名: Niiya H et al.
  • 雑誌名: Experimental Hematology 33・7 ページ: 811-818
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Direct recognition and lysis of leukemia cells by WT1-specific CD4^+ T lymphocytes in an HLA class II-restricted manner. (2005)
  • 著者名/発表者名: Guo Y, Niiya H, Azuma T, Uchida N, Yakushijin Y, Saki I, Hato T, Takahashi M, Senju S, Nishimura Y, Yasukawa M
  • 雑誌名: Blood 106(4) ページ: 1415-1418
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Patients with platelet dysfunction characterized by transient and reversible aggregation in response to ADP despite normal collagen-induced aggregation. (2005)
  • 著者名/発表者名: Iijima K, Yoshioka A, Matsumoto H, Hara A, Hato T.
  • 雑誌名: American Journal of Hematology 80(2) ページ: 167-168
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Novel RUNX1-PRDM16 fusion transcripts in a patient with acute myeloid leukemia showing t(1;21)(p36;q22). (2005)
  • 著者名/発表者名: Sakai I, Tamura T, Narumi H, Uchida N, Yakushijin Y, Hato T, Fujita S, Yasukawa M.
  • 雑誌名: Genes, Chromosomes & Cancer. 44(3) ページ: 265-270
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Differential regulation of perforin expression in human CD4+ and CD8+ cytotoxic T lymphocytes. (2005)
  • 著者名/発表者名: Niiya H, Sakai I, Lei J, Azuma T, Uchida N, Yakushijin Y, Hato T, Fujita S, Yasukawa M.
  • 雑誌名: Experimental Hematology 33(7) ページ: 811-818
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Critical residues for ligand binding in blade 2 of the propeller domain of the integrin αIIb subunit. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tamura T et al.
  • 雑誌名: Thrombosis and Haemostasis 91・1 ページ: 111-118
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Suppression of integrin activation by the membrane-distal sequence of the integrin αIIb cytoplasmic tail. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamanouchi J et al.
  • 雑誌名: Biochemical Journal. 379 : 317-323,2004. 379・Pt2 ページ: 317-323
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of an epitope on glycoprotein IIb-IIIa that is recognized by HLA-DRB1*0405-restricted CD4^+ T cells from a patient with immunne thrombocytopenic purpura. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamanouchi et al.
  • 雑誌名: Journal of Thrombosis and Haemostasis 2・2 ページ: 348-350
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Existence of leukemic clones resistant to both imatinib mesylate and retuximab before drug therapies in a patient with Philadelphia chromosome-positive acute lymphocytic leukemia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Hato T et al.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 80・1 ページ: 62-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Role ofCD21 antigen in deffuse large B-cell lymphoma and its clinical significance (2004)
  • 著者名/発表者名: Otsuka M et al.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 127・4 ページ: 416-424
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Critical residues for ligand binding in blade 2 of the propeller domain of the integrin αIIb subunit. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tamura T, Hato T, Yamanouchi J, Fujita S.
  • 雑誌名: Thrombosis and Haemostasis 91(1) ページ: 111-118
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Suppression of integrin activation by the membrane-distal sequence of the integrin αIIb cytoplasmic tail. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamanouchi J, Hato T, Tamura T, Fujita S.
  • 雑誌名: Biochemical Journal 379(Pt2) ページ: 317-323
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of an epitope on glycoprotein IIb-IIIa that is recognized by HLA-DRB1^*0405-restricted CD4^+ T cells from a patient with immune thrombocytopenic purpura. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamanouchi J, Hato T, Tamura T, Fujita S, Yasukawa M.
  • 雑誌名: Journal of Thrombosis and Haemostasis 2(2) ページ: 348-350
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Existence of leukemic clones resistant to both imatinib mesylate and rituximab before drug therapies in a patient with Philadelphia chromosome-positive acute lymphocytic leukemia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Hato T, Yamanouchi J, Tamura T, Hojo N, Niiya Y, Kohno M, Bando S, Yakushijin Y, Takada K, Sakai I, Yasukawa M, Fujita S.
  • 雑誌名: International Journal of Haematology 80(1) ページ: 62-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Role of CD21 antigen in diffuse large B-cell lymphoma and its clinical significance (2004)
  • 著者名/発表者名: Otsuka M, Yakushijin Y, Hamada M, Hato T, Yasukawa M, Fujita S.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 127(4) ページ: 416-424
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より