FLT3阻害剤を用いた11q23転座型小児急性白血病に対する分子標的療法

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 16591018
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 杉田 完爾 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助教授 (60138055)
• 研究分担者: 犬飼 岳史 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (30293450) ; 合井 久美子 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (70324192)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• キーワード: PKC412 / FLT3阻害剤 / 11q23転座 / 小児ALL / アポトーシス / 細胞回転停止

研究概要

11q23転座型白血病細胞はFLT3を高発現していることが知られている。11q23転座型白血病細胞株(n=9)を用いてFLT3阻害剤PKC412の抗白血病効果とそのメカニズムを検討した。FLT3キナーゼドメイン内にD835点突然変異があり、FLT3が恒常的に活性化されている2細胞株においては、PKC412濃度50-100nMで、wild-type FLT3を有する7細胞株においては200-400nMで増殖がほぼ完全に阻害された。BrdU/PI法による細胞回転の解析では、PKC濃度200nMで48時間培養すると有意にG0/G1期の細胞が増加し、S期の細胞が減少した。G0/G1停止の程度にはD835突然変異の有無による差異は認められなかった。Annexin V/PI法によるアポトーシス誘導の検討では、PKC412濃度200nMで72時間培養すると、D835突然変異を有する細胞株では60-70%の細胞に、有しない細胞株では30-40%の細胞にアポトーシスが誘導され、カスペース阻害剤の添加でほぼ完全に阻害された。次に、Western blot法を用いた細胞回転停止、アポトーシス誘導の分子メカニズムの検討をおこなった。FLT3のシグナルを伝達する主要分子であるSTAT5はD835突然変異を有する株では強く、有しない株では弱くリン酸化されているが、PKC412(200nM)を添加すると、12時間以内にほぼ完全に脱リン酸化された。他のシグナル伝達分子MAPKとAktのリン酸化もPKC412の添加で種々の程度に脱リン酸化された。また、PKC412の添加で細胞回転を正に制御しているBf-1とcyclin Dあるいはcyclin Eの発現が低下した。一方、細胞回転を負に制御しているp21やp27の発現には変化が認められなかった。アポトーシス関連分子の検討では、PKC412の添加後にBcl-2,Bcl-XL,Bax,Bad,Bidなどの発現に変化が認められなかったが、BH3-onlyに属するアポトーシス誘導分子Bimの著明な発現増強が認められた。以上の結果から、PKC412はシグナル伝達分子の脱リン酸化と細胞回転促進分子の発現低下を誘導することによって11q23転座型細胞株をGo/G1期に停止させ、Bimの発現を増強することで、特にD835点突然変異を有する細胞株にアポトーシスを誘導することが明らかとなり、PKC412は11q23転座型急性白血病の有力な治療薬となる可能性がある。

研究成果

• [雑誌論文] Clonotypic analysis of acute lymphoblastic leukemia with a double TEL-AML1 fusion at onset and relapse. (2006)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Goi K, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Leukemia 20・2 ページ: 363-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] A successful case of allogeneic bone marrow transplantation for osteosarcoma with multiple metastases of lung and bone. (2006)
  • 著者名/発表者名: Goi K, Sugita K, Inukai T, et al.
  • 雑誌名: Bone marrow Transplantation 37 ページ: 115-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Clonotypic analysis of acute lymphoblastic leukemia with a double TEL/AML1 fusion at onset and relapse. (2006)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Yokota S, Okamoto T, Nemoto A, Akahane K, Takahashi K, Sato H, Goi K, Nakazawa S, Sugita K.
  • 雑誌名: Leukemia 20 ページ: 363-365
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A successful case of allogeneic bone marrow transplantation for osteosarcoma with multiple metastases of lung and bone. (2006)
  • 著者名/発表者名: Goi K, Sugita K, Tezuka T, Sato H, Uno K, Inukai T, Hamada Y, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Bone Marrow Transpl 37 ページ: 115-116
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Induction of impaired membrane phospholipids asymmetry in mature erythrocytes after chemotherapy. (2005)
  • 著者名/発表者名: Zhang X, Inukai T, Goi K, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 82・2 ページ: 132-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] TEF, anti-apoptotic bZIP transcription factor related to the oncogenic E2A-HLF chimera, inhibits cell growth by downregulationg expression of the common β chain of cytokine receptors. (2005)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Goi K, Sugita K, el.al
  • 雑誌名: Blood 105・11 ページ: 4437-44
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] No advantage of dexamethasone over predonisolone for the outcome of standard and intermediate risk childhood acute lymphoblastic leukemia in the Tokyo Children's Cancer Studygroup L95-14 protocol. (2005)
  • 著者名/発表者名: Igarashi S, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: J Clin Oncol 20・ ページ: 6489-6498
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Induction of impaired membrane phospholipid asymmetry in mature erythrocytes after chemotherapy (2005)
  • 著者名/発表者名: Xiaochum Z, Inukai T, Hirose K, Akahane K, Nemoto A, Takahashi K, Sato H, Goi K, Kagami K, Sugita K, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Int J Hematol 82 ページ: 132-136
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] TEF, an anti-apoptotic bZIP transcription factor related to the oncogenic E2A-HLF chimera, inhibits cell growth by downregulating expression of the common b chain of cytokine receptors. (2005)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Inaba T, Dang J, Kuribara R, Ozawa K, Miyajima A, Wu Wenshu, Look AT, Arinobu Y, Iwasaki H, Akashi K, Kagami K, Goi K, Sugita K, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Blood 105 ページ: 4437-4444
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] No advantage of dexamethasone over predonisolone for the outcome of standard and intermediate risk childhood acute lymphoblastic leukemia in the Tokyo Children's Cancer Study group L95-14 protocol. (2005)
  • 著者名/発表者名: Igarashi S, Manabe A, Ohara A, Kumagai M, Saito T, Okimoto Y, Kamijo T, Isoyama K, Kajiwara M, Sotomatsu M, Sugita K, Sugita K, Maeda M, Yabe H, Kinoshita T, Kaneko T, Hayashi Y, Ikuta K, Hanada R, Tsuchiya M.
  • 雑誌名: J Clin Oncol 20 ページ: 6489-6498
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Roles of Bim in apoptosis of normal and Bcr-Abl-expressiong hematopoietic progenitors. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuribara R, Inukai T, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Molecular and Cellular Biology 24・12 ページ: 6172-83
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Non-T cell-depleted HLA haploidentical stem cell transplantation based on feto-maternal microchimerizm in pediatric patients with advanced malignancies. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yoshihara T, Inukai T, Goi K, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Bone marrow Transplantation 34・ ページ: 373-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] CD19-targeting liposomes containing imatinib efficiently kill Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Harata M, Sugita K, Nakazawa S. et al.
  • 雑誌名: Blood 104・ ページ: 1442-1449
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Hepatocyte growth factor prevents small airway epithelial cells from apoptosis induced by tumor necrosis factor-□ or oxidative stress. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okada M, Sugita K, Inukai T, Goi K, et al.
  • 雑誌名: Pediatr Res. 56・ ページ: 336-344
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of protein S α gene mutations including four novel mutations in eight unrelated patients with protein S deficiency. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okada H, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Brit J Haematol 126・ ページ: 219-225
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] A novel Maxizyme vector targeting a bcr-abl fusion gene induced specific cell death in Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Soda Y, Sugita K, Nakazawa S, et al.
  • 雑誌名: Blood 104・ ページ: 356-363
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Transient decrease in the CD45RA expression on T lymphocytes in newborns following fetal distress. (2004)
  • 著者名/発表者名: Mizobe N, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Biol Neonate 85・ ページ: 61-67
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] FLT3 mutations in the activation loop of tyrosine kinase domain are frequently found in infant acute lymphoblastic leukemia (ALL) with MLL rearrangement and pediatric ALL with hyperdiploidy. (2004)
  • 著者名/発表者名: Taketani T, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Blood 103・ ページ: 1085-1088
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Nuclear accumulation of β-catenin without an additional somatic mutation in cording region of the APC gene in hepatoblastoma from a familial adenomatous polyposis patient. (2004)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Sugita K, et al.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 11・ ページ: 121-126
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Pivotal roles of Bim, a proapoptotic relative of Bcl-2, in the leukemogenesis of chronic myeloid leukemia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuribara R, Honda H, Matsui H, Shinjyo T, Inukai T, Sugita K, Nakazawa S, Hirai H, Ozawa K, Inaba T.
  • 雑誌名: Mol Cell Biol 24 ページ: 6172-6183
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Non-T-cell-depleted HLA haploidentical stem cell transplantation based on feto-maternal microchimerizm in pediatric patients with advanced malignancies. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yoshihara T, Morimoto A, Inukai T, Kuroda H, Ishida H, Sugita K, Goi K, Imamura T, Todo S, Maruya E, Saji H, Nakazawa S, Imashuku S.
  • 雑誌名: Bone Marrow Transpl 34 ページ: 373-375
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] CD19-targeting liposomes containing imatinib efficiently kill Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Harata M, Soda Y, Tani K, Ooi J, Takizawa T, Chen M, Bai Y, Izawa K, Kobayashi S, Tomonari A, Nagamura F, Takahashi S, Uchimaru K, Iseki T, Tsuji T, Takahashi TA, Sugita K, Nakazawa S, Tojo A, Maruyama K, Asano S.
  • 雑誌名: Blood 104 ページ: 1442-1449
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Hepatocyte growth factor prevents small airway epithelial cells from apoptosis induced by tumor necrosis factor-α or oxidative stress. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okada M, Sugita K, Inukai T, Goi K, Kagami K, Kawasaki K, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Pediatr Res. 56 ページ: 336-344
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of protein Sα gene mutations including four novel mutations in eight unrelated patients with protein S deficiency. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okada H, Takagi A, Murate T, Adach T, Yamamoto K, Matsushita T, Takamatsu J, Sugita K, Sugimoto M, Yoshioka A, Yamazaki T, Saito H, Kojima T.
  • 雑誌名: Brit J Haematol 126 ページ: 219-225
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A novel Maxizyme vector targeting a bcr-abl fusion gene induced specific cell death in Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia (2004)
  • 著者名/発表者名: Soda Y, Tani K, Bai Y, Saiki M, Chen M, Izawa K, Kobayashi S, Takahashi S, Uchiyama K, Kuwabara T, Warashina M, Tanabe T, Miyoshi H, Sugita K, Nakazawa S, Tojo A, Taira K, Asano S.
  • 雑誌名: Blood 104 ページ: 356-363
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Transient decrease in the CD45RA expression on T lymphocytes in newborns following fetal distress. (2004)
  • 著者名/発表者名: Mizobe N, Sugita K, Tezuka T, Sakamoto M, Yokoyama T, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Biol Neonate 85 ページ: 61-67
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] FLT3 mutations in the activation loop of tyrosine kinase domain are frequently found in infant acute lymphoblastic leukemia (ALL) with MLL rearrangement and pediatric ALL with hyperdiploidy. (2004)
  • 著者名/発表者名: Taketani T, Taki T, Sugita K, Furuich Y, Ishii E, Hanada R, Tsuchida M, Sugita K, Hayashi Y.
  • 雑誌名: Blood 103 ページ: 1085-1088
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Nuclear accumulation of β-catenin without an additional somatic mutation in cording region of the APC gene in hepatoblastoma from a familial adenomatous polyposis patient. (2004)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, Furuuchi K, Sugita K, Uno K, Mishina M, Ooi A, Sasaki F, Hamada J, Moriuchi T, Nakazawa S.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 11 ページ: 121-126
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [図書] 小児血液悪性疾患-説明と同意の治療戦略 (2004)
  • 著者名/発表者名: 杉田完爾等
  • 総ページ数: 387
  • 出版者: 医薬ジャーナル社
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [図書] みんなに役立つ白血病の基礎と臨床 (2004)
  • 著者名/発表者名: 杉田完爾等
  • 総ページ数: 559
  • 出版者: 医薬ジャーナル社
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より