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2005 年度 実績報告書

先天性高乳酸血症の診断と病因解明に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 16591052
研究機関埼玉医科大学

研究代表者

大竹 明  埼玉医科大学, 医学部, 助教授 (00203810)

研究分担者 佐々木 望  埼玉医科大学, 医学部, 教授 (00009672)
キーワード先天性高乳酸血症 / Blue Native電気泳動 / 皮膚線維芽細胞 / ミトコンドリア呼吸鎖異常症 / イムノブロット解析 / 活性染色 / 血中Lactate / Pyruvate比
研究概要

目的:先天性高乳酸血症は最も頻度の高い先天代謝異常症であるが、現在もその6割は病因不明である。本研究はBlue Native電気泳動(BNPAGE)を用いてその中でも最も頻度の高い呼吸鎖異常症の病因診断を行うことを目的とする。
材料:高乳酸血症日本人20症例より得た皮膚線維芽細胞。
方法:まずグルコースをガラクトースで置き換えた培地中での線維芽細胞の生育能で呼吸鎖異常症のスクリーニングを行う。次いで線維芽細胞から精製したミトコンドリア画分を材料とし、4〜13%BNPAGEで展開後、以下を行う。(i)呼吸鎖I〜Vの各種サブユニットに対するモノクローナル抗体を用いたイムノブロット解析(量と大きさ)、(ii)酵素活性染色(活性)
結果:ガラクトース培地中での生育能に異常を認めた細胞はなかった。呼吸鎖Iについては、イムノブロット解析で複合体量が著減し活性染色で低下を呈した症例が2例、量・活性共に軽度減少を認めた症例が7例、イムノブロット上異常パターンを認めた症例が2例であり、即ち20例中11例(55%)に呼吸鎖1の異常を認めた。呼吸鎖II〜Vについては量・活性共に異常を認めた症例はなかった。
結論と考察:呼吸鎖I複合体量の著減した2例については呼吸鎖I異常症と確定診断できた。この症例は血中Lactate/Pyruvate比が高値傾向を示した他に臨床的な鑑別点は特に見当たらず、臨床徴候による原疾患の鑑別は困難であると考えられた。今後In vitro酵素活性による確定診断を行うと共に、マイクロアレイ法を用いて各サブユニットの発現量解析を進め、発現量の異常を認めた遺伝子について精密解析を行い確定診断に至りたい。
BN PAGEは、膜タンパクなどの疎水性大分子を丸ごと解析できる優れた方法であり、さらにイムノブロット解析を用いることで大きさと量が、酵素活性染色にて酵素活性を調べることができる。BNPAGEはミトコンドリア呼吸鎖異常症をはじめとする高乳酸血症の鑑別・スクリーニングに大変有用であると思われる。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2006 2005

すべて 雑誌論文 (2件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] 劇症1型糖尿病の臨床像を呈した乳児期発症1型糖尿病の1例.2005

    • 著者名/発表者名
      小林啓二, 佐藤浩一, 大竹 明他
    • 雑誌名

      糖尿病 48・5

      ページ: 337-339

  • [雑誌論文] 特集 血糖調節from A to Z III.最新のトピックス糖脂質代謝異常に伴う低血糖.2005

    • 著者名/発表者名
      大竹 明
    • 雑誌名

      小児科診療 68・10

      ページ: 1887-1892

  • [図書] 新生児期に緊急処置を要する先天代謝異常. 小児の治療指針(小児科診療 69 増刊)2006

    • 著者名/発表者名
      大竹 明
    • 出版者
      診断と治療社(In press)

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公開日: 2007-04-02   更新日: 2016-04-21  

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