| 研究課題/領域番号 |
16591462
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
長尾 建樹 東邦大学, 医学部, 助教授 (20167555)
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| 研究分担者 |
清木 義勝 東邦大学, 医学部, 教授 (80147561)
狩野 利之 東邦大学, 医学部, 助手
青木 美憲 東邦大学, 医学部, 助手
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| キーワード | 切片 / てんかん / 海馬 / 内嗅領 / 扁桃核 |
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| 研究概要 |
側頭葉てんかんの病理所見は海馬の神経細胞脱落が特徴的で海馬硬化症として知られているが、近年、海馬に隣接した、海馬への神経入力線維のほとんどが起始している内嗅領での神経細胞の変性が報告され、海馬とともに形成される神経回路が側頭葉てんかんの発現に重要な役割を演じていると考えられてきている。また、扁桃核との関連も発作の伝播や抑制において注目されている。我々はラットの内嗅領を含み神経回路を保ったままの海馬拡大切片を開発し、内嗅領のてんかん原性と内嗅領から海馬へ入力された興奮の海馬内でのモジュレーションの解明を行ってきた。しかし大脳辺縁系全体に及ぶ側頭葉てんかん発作のメカニズムを明らかにするためにはさらに拡大した神経回路を保った切片の開発が重要と考えられ、扁桃核、内嗅領、海馬を同一平面上に含む切片の作製を計画した。
解剖学的特徴を捉えながらラット海馬内嗅領扁桃核領域を様々な角度から切り出し、また周囲脈管やくも膜の剥離方法を工夫し、脳を摘出後ビブラトームで切片を作成した。この切片をインターフェース型の潅流槽に載せ35度に保温しながら酸素化した人工髄液で潅流し、扁桃核の双極刺激を行った。同時に内嗅領皮質、海馬顆粒細胞層から電位記録を行い、刺激が海馬へ伝播するかどうかを各スライスで検討した。以上の実験により神経線維連絡が保たれ再現性のある安定した反応を得るために以下の手技を確立することができた。
1.腹側の海馬内嗅領扁桃核が同一平面内に神経回路を保ちやすく、その切片の切り出し角度は大脳長軸とほぼ平行した水平断が至適であった。
2.皮質の損傷を最小限に食い止めるため脳表面の脈管やくも膜は無理に剥離せず、また、切片切り出しには高周波のビブラトームが適当であった。
3.潅流層内で細胞外電位を記録するためには、300-500uの厚さの切片が適当であった。
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