| 研究課題/領域番号 |
16591592
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
林 辰弥 三重大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00242959)
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| 研究分担者 |
鈴木 宏治 三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (70077808)
岡本 貴行 三重大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (30378286)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| キーワード | プロテインCインヒビター / 腎癌 / CpGメチレーション / 乳癌細胞 / セリンプロテアーゼインヒビター / 浸潤 / 転移 / 反応部位 |
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| 研究概要 |
プロテインCインヒビター(PCI)は主として肝臓、腎臓、及び精巣、卵巣などの生殖臓器で発現されるセリンプロテアーゼインヒビターで、血漿PCIは、抗凝固セリンプロテアーゼの活性化プロテインC(APC)の阻害因子として、尿中PCIは、主として尿プラスミノゲンアクチベータの阻害因子として、精漿PCIは前立腺特異抗原や精子アクロシンなどの阻害因子として機能する。我々は、これまで、腎臓では主として近位尿細管上皮細胞(Renal proximal tubular epithelial cell : RPTEC)でPCIが発現されること、腎癌及び株化腎癌細胞(両者とも腎近位尿細管上皮細胞由来)ではPCIの発現が著しく低下すること、PCIがin vitroでの株化腎癌細胞(Caki-1細胞)のマトリゲル浸潤能を抑制すること、さらに株化腎癌細胞でのPCI発現の低下はPCI遺伝子のメチル化に起因することを見出した。そこで、本研究では、株化腎癌細胞を用いて腎癌でのPCI遺伝子のメチル化によるPCI発現低下機序、さらには、PCIの癌細胞のin vitroにおける浸潤能やin vivoにおける増殖、浸潤・転移能に及ぼす影響及びそれらにおけるPCIのプロテアーゼ阻害活性の必要性について、PCI、プロテアーゼ阻害活性を持たないPCIの354番目のアルギニンをアラニンに変化させたPCI(R354A-PCI)及びプロテアーゼにより分解されたPCIのN末端側断片(NT-PCI)を発現する乳癌細胞を遺伝子工学的手法を用いて作成し、検討した。その結果、腎癌部におけるPCI発現の低下は、PCI遺伝子の上流500bpの領域に集中して存在する13個のCpG配列のうち、転写開始点近傍の4ヵ所のCpG配列の特異的なメチル化に起因すること、さらに癌細胞のin vitroにおける浸潤阻害活性はPCIのインヒビター活性に依存し、in vivoにおける増殖、浸潤・転移抑制活性はPCIのインヒビター活性に依存しないことが明らかになった。
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