| 研究課題/領域番号 |
16591598
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
土田 昌弘 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (80325216)
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| 研究分担者 |
高井 公雄 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (10284241)
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| キーワード | Jurkat T cell / apoptosis / camptothecine / heat shock protein(HSP) / geranylgeranylacetone |
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| 研究概要 |
急性ヒトT細胞性白血病細胞(Jurkat T cell clone E6-1)を用いて以下の実験を行った。
A)camptothecine、熱ショックによるapoptosisの証明
1.Jurkat T cellをcamptothecineとともにincubation、あるいは45℃で培養液とともにincubation後、Jurkat T cellからDNAを抽出。抽出したDNAをagarose gelを用いて電気泳動し、DNA fragmentationを検出した。1.25-20μMのcamptothecineで濃度依存的にDNA ladderを認めた。
2.Jurkat T cellを1.25-10μMのcamptothecineとともにincubation、あるいは45℃で培養液とともにincubation後、蛋白を可溶化しWestern blottingにてPARP、caspase-3、caspase-9の発現を検討した。いずれの蛋白も濃度依存的に発現が増強した。
B)GGAによるHSP発現の検討
Jurkat T cellを10^<-8>-10^<-3>MのGGAとともにincubation後、蛋白を可溶化しWestern blottingnにてHSP27、HSP70、HSP90の発現を検討した。HSP27、HSP90の発現増強は認めなかったが、HSP70の発現増強(10^<-4>Mで最大)を認めた。
C)GGAによるapoptosis抑制効果の検討
1.Jurkat T cellをGGA(10^<-5>M)による前処理した群、前処理してない群に分け、A)-1と同様にcamptothecine(5μM)とともにincubation、あるいは45℃で培養液とともにincubation後、DNAを抽出しagarose gelを用いて電気泳動を行いDNA fragmentationを検討した。GGA前処理群ではDNA ladder抑制が認められた。
2.上記処理したJurkat T cellからA)-2、3と同様の方法でPARP、caspase-3、caspase-9の発現検討した。GGA前処理によりこれらの蛋白の発現増強が抑制された。
以上の結果よりJurkat T cellにおけるGGAの抗apoptosis効果が確認された。
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