| 研究課題/領域番号 |
16591780
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| 研究機関 | 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所 |
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研究代表者 |
渡部 眞三 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 主任研究員 (10093486)
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| 研究分担者 |
中村 誠 名古屋大学, 大学院医学系研究科眼科学専攻, 助教授 (60283438)
時田 義人 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 研究員 (50291175)
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| キーワード | 視神経再生 / 網膜培養 / 神経突起伸展 / Rho / ROCK阻害剤 / Microcrush / Y39983 / Fasudil / OFF神経節細胞 |
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| 研究概要 |
1.ROCK阻害剤による培養網膜と挫滅視神経内での軸索再生
成ネコ網膜の小片を3D培養し、培養液にROCK阻害剤のY27632、あるいはY39983を添加して、神経突起とグリア突起を免疫組織学的に識別し、数を数えた。その結果、Y27632では10μMから300μMで神経突起数が最も多く、1mMでは突起伸展が完全に阻害されていた。Y39983では3-10μMで神経突起数が最も多く、30μMで突起伸展が完全に阻害されていた。
Y39983の挫滅した視神経内での軸索再生促進作用を、10μMと100μMの濃度で検討した。ネコの左視神経を挫滅し、薬剤を眼球内と挫滅部に注入した。WGA-HRPで視神経線維を順行性に標識した。生理食塩水を注入した視神経(対照)では、挫滅部を超えて中枢側へ0.5mm以上伸びる線維はほとんどなかったが、Y39983を10μM注入した視神経では約2,000本の線維が0.5mm以上伸展し、7日後にさらに10μM注入した視神経では再生線維数が2倍以上に増加していた。Y27632の軸索再生促進は、100μMで最も高く、再生線維の長さも長かった。このことからROCK阻害剤の神経突起の伸展促進が、視神経再生に重要であることがわかった。
2.OFF中心型網膜神経節細胞の軸索切断に対する脆弱性と軸索再生
移植された末梢神経内に軸索を再生する神経節細胞は、ON中心型が多い。軸索を再生させた神経節細胞の数を増加させた場合、ON細胞とOFF細胞の不均衡が是正されるかどうか調べた。神経栄養因子BDNFを眼球内注入した場合、ON細胞のみが増加し、緑内障治療薬を入れた場合はどちらも増加することがわかった。BDNFの受容体TrkBの分布は内網状層ON亜層に密で、BDNFのON細胞に対する神経保護作用はこの分布によるものと考えられた。
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