| 研究概要 |
本年度の私共の研究実績は、1.酸化ストレスによる核DNAの酸化的損傷を定量的に評価できる非破壊的方法を確立したこと、2.ジストロフィン欠損Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)の治療のための有効な薬剤を発見したことである。
DNAに含まれる4種の塩基の中でグアニンは酸化ストレスに最も弱く、酸化されて8-オキソグアニン(OxoG)となる。私共は、まず、核DNA中のOxoGに特異的なモノクロ抗体を組み換え技術を用いて作製した。そして、核DNAのニュートラルレッドによる染色、及び抗ラミニン抗体と抗OxoG抗体を用いた免疫重染色を組み合わせて、筋核のDNA量に対するOxoG量を求める新しい方法を開発した(特願2004-160398;Nakae et al.,Histochemistry and Cell Biology,2005,124,335-345)。本法を用いることによって、2-7歳のDMD患者の上腕二頭筋の筋細胞核DNAは、正常筋のものより酸化的損傷が14%増大していることが明らかとなった。
さらに、私共の開発した上記の方法の正当性をDMDのモデル動物であるmdxマウスの筋を用いて明らかにした。mdxマウスの横隔膜は8週齢では筋変性と再生の像を示した。しかし、舌筋ではそれらの像は極めてまれで、殆ど正常像を示した。Mdx横隔膜の筋核DNA中のOxoG含量は健常筋マウスのものより30%高かったが、舌筋ではmdxと健常マウスでその含量は等しく、低値を示した。細胞質に局在するリポフスチン顆粒(老化色素;Nakae et al.,Journal of Molecular Histology,2004,35,489-499)の蓄積量とOxoG含量の間に相関が認められた(Nakae et al.,Acta Anatomica Nipponica,2006,81(Suppl),214)。これらの結果から、私共の開発したOxoG定量方法の正当性が示された。筋変性が起こっているジストロフィン欠損骨格筋細胞では酸化ストレスが高まっており、酸化ストレスと筋ジストロフィーの病理との関連が示唆された。
私共はまた、種々の薬剤を一定期間mdxマウスに投与した後、骨格筋、肝臓、腎臓及び血液を採取し、薬剤投与の影響を組織化学的、生化学的及び生理学的方法により詳しく調べた。その結果、物質Aがmdxマウスの筋ジストロフィー症状を改善することを発見した(特願2005-237366)。その有効性から物質Aがヒト筋ジストロフィー(DMD)の治療への道を拓くものと期待される。物質Aの分子作用機序を現在研究中である。
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