| 研究概要 |
細胞膜上には脂質ラフトと呼ばれるコレステロールとスフィンゴ糖脂質に富む場所が存在し、多くのシグナル分子が局在している。グラム陰性細菌の主要な構成成分であるリポポリサッカライド(LPS)は、骨吸収促進因子として知られており、TLR4やMyD88、TRAF6などの分子を介して破骨細胞を延命させる。本研究では、破骨細胞においてLPSを認識する自然免疫系のシグナル分子がラフトに存在するかを明らかにし、破骨細胞の延命とシグナル伝達におけるスフィンゴ糖脂質の役割を調べた。LPS存在下、破骨細胞はよく延命する。LPSと同時にGlcCer合成阻害剤であるPDMP添加により延命効果は阻害された。さらに、外からGM1などのスフィンゴ糖脂質を追加するとPDMPによる阻害効果はキャンセルされた。LPS刺激後経時的に破骨細胞を回収し、Triton不溶性画分をショ糖密度勾配超遠心とWestern blotting法を用いてシグナル分子の局在を解析した。刺激30分後には、ラフト分子であるGM1,Flotillin,SrcがTriton不溶性画分3に局在していた。またTLR4,CD14,MyD88,IRAK1/4,TRAF6などの自然免疫系のシグナル分子は、それまでばらばらに存在していたものが画分3に集積してくるのが確認された。興味深いことにPDMPを添加すると画分3への集積が見られなくなり、さらに外からGM1を追加すると、これら分子の画分3への集積が回復した。LPSはNF-κBを活性化させ破骨細胞を延命させる。LPS刺激30分後にはNF-κBp65subunitの核移行が蛍光免疫染色で観察された。さらにPDMP処理によりp65の核移行は抑制され、GM1の追加により核移行は回復した。以上より、破骨細胞の自然免疫システムにはラフトやスフィンゴ糖脂質が重要な働きをしていることが明らかとなった。
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