| 研究概要 |
我々は蛋白質脱リン酸化酵素阻害剤が口腔癌細胞にアポトーシスを誘導すること,上記の癌細胞に蛋白質脱リン酸化酵素1型(PP1)の各アイソフォーム(PP1α,PP1γ-1,PP1δ)がそれぞれ特異的な細胞内局在を示すことを示した。特にPP1δは細胞核に5-7個のドット様構造物として,核小体に強力に発現した。この存在様式はリボゾームRNA合成の場と考えられ,悪性腫瘍細胞に高度に発現し,硝酸銀により染色されるNucleolar Organizer Regions (NORs)の細胞内局在と酷似する。正常細胞では,核小体に5-7個のドット様構造物としてAgNORsが検出されたが,アポトーシス細胞では,この構造物は分解されて検出されなかった。AgNORsの構成蛋白ニュークレオリンも分解されて80kDaに断片化された。in vitroアポトーシス系においてもニュークレオリンの発現は減少し,分子量80kDaのニュークレオリンの分解産物の量が増加した。PP1δをRNAiすると他のPP1の発現は抑制を受けなかったが,PP1δの発現は著しく抑制された。
ヒト舌癌由来の扁平上皮癌細胞(SCCTF)はブレオマイシンに対し耐性を示すが,SCCKN細胞は耐性を示さない。頭頸部悪性腫瘍の治療に用いられるペプロマイシンで両細胞を処理すると,SCCKN細胞はSCCTF細胞に比べて,より低濃度のPEP処理によりアポトーシスが誘導された。また,SCCTF細胞はSCCKN細胞に比べMDR1mRNAを高発現し,MDR1プロモーター領域のCCAAT配列に対する転写調節因子NF-Yの結合能が高かった。CCAAT領域を含むルシフェラーゼコンストラクトを導入すると,SCCTF細胞ではSCCKN細胞に対し10倍以上転写活性が上昇した。この配列を欠失,あるいは変異させたコンストラクトを導入した場合では転写活性の上昇は認められなかった。
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