| 研究課題/領域番号 |
16592067
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
澁谷 拓也 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (20363153)
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| 研究分担者 |
中江 英明 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教授 (30227730)
浦山 明久 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (40304539)
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| キーワード | histon-like prote / Porphyromonas gingivalis / biofilm / 薬剤耐性遺伝子 / GST融合蛋白 / suicide vector |
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| 研究概要 |
TIGRによりゲノム解析が行われ配列が公表されている歯周病関連細菌Porphyromonas gingivalis W83染色体DNA配列に既知のHLPのアミノ酸配列とhomology searchを行い、高いidentityを有する配列に基づいてprimerを設定後、PCRを行った結果、P.gingivalis hlpが得られた。この方法で既にDatabase解析で既知のHLPとアミノ酸レベルで50数パーセントのidentityを認められた。得られたhlp geneをGST融合発現ベクターにin frameに挿入後、大腸菌にsubcloningし、融合蛋白質として誘導発現させた。発現したGST融合HLPは、glutathione sepharose columnで精製を行った後、酵素処理にてGSTを切断し、recombinant HLPを精製した。現在、精製したrHLPをウサギに免疫し、rHLP抗血清を得ようとしている。
次に、Biofilmの実験的形成系を、よりin vivo環境に近いBiofilm形成系を確立するため、嫌気培養システム(Thermo Forma, Anaerobic System)内にペリスタポンプを使用した培地循環流路系を用いてin vivo環境を考慮したBiofilm形成系を確立した。
また、上記のようにcloningしたhlp geneの内部配列に薬剤耐性遺伝子を挿入してsuicide vectorを構築した後、P.gingivalisに導入し、相同組換えによりhlp欠損株(mutant)を現在作製中である。
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