| 研究課題/領域番号 |
16592067
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
澁谷 拓也 徳島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (20363153)
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| 研究分担者 |
中江 英明 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教授 (30227730)
浦山 明久 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (40304539)
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| キーワード | histon-like protein / Porphyromonas gingivalis / biofilm / GST融合蛋白 / suicide vector |
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| 研究概要 |
平成16年度でTIGRによりゲノム配列が公表されている歯周病関連細菌Porphyromonas gingivalis W83染色体DNA配列に他の細菌で知られているHLPのアミノ酸配列とhomology検索を行い、高いidentityを有する配列に基づいてprimerを設定後、PCRにより、Database解析で既知のHLPとアミノ酸レベルで50数パーセントのidentityを認められたP.gingivalis hlpを得た。平成17年度は得られたhlp geneをGST融合発現ベクターにin frameに挿入後、大腸菌にsubcloningし、融合蛋白質として誘導発現させた。発現したGST融合HLPは、glutathione sepharose columnで精製を行った後、酵素処理にてGSTを切断し、SDS-PAGEにて分子量を確認し、このようにしてrecombinant HLPを精製した。精製したrHLPをウサギに免疫し、rHLP抗血清を得、その特異性をウェスタンブロットにて確認した。次に、Biofilmの実験的形成系を、よりin vivo環境に近いBiofilm形成系を確立するため、嫌気培養システム(Thermo Forma, Anaerobic System)内にHPLC用のペリスタポンプ(LKB)を使用した培地循環流路系を用いてin vivo環境を考慮したBiofilm形成系を確立した。
また、上記のように作製したバイオフィルム中でのHLPの局在を作製した抗血清を用いて透過型電子顕微鏡にて検索中である。
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