| 研究課題/領域番号 |
16592067
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
歯周治療系歯学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
澁谷 拓也 徳島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (20363153)
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| 研究分担者 |
中江 英明 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教授 (30227730)
浦山 明久 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (40304539)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| キーワード | histon-like protein / Porphyromonas gingivalis / biofilm / GST融合蛋白 / suicide vector / anaerobic system / antibody |
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| 研究概要 |
TIGRによりゲノム解析が行われ配列が公表されている歯周病関連細菌Porphyromonas gingivalis W83染色体DNA配列に既知のEscherichia coliやStreptococuss aureusなどのHLPのアミノ酸配列とhomology検索を行い、高いidentityを有する配列に基づいてprimerを設定後、PCRを行った結果、P.gingivalis hlpを得た。この方法で既にDatabase解析で既知のHLPとアミノ酸レベルで50数パーセントのidentityを認められた。得られたhlp geneをGST融合発現ベクターにin frameに挿入後、大腸菌にsubcloningし、融合蛋白質として誘導発現させた。発現したGST融合HLPは、glutathione sepharose columnで精製を行った後、酵素処理にてGSTを切断し、recombinant HLPを精製した。現在、精製したrHLPをウサギに免疫し、rHLP抗血清を得、特異性をウェスタンブロットにて確認した。
次に、Biofilmの実験的形成系を、よりin vivo環境に近いBiofilm形成系を確立するため、嫌気培養システム(Thermo Forma, Anaerobic System)内にHPLC用のペリスタポンプを使用した培地循環流路系を用いてin vivo環境を考慮したBiofilm形成系を確立した。
また、上記のように作製したバイオフィルム中でのHLPの局在を作製した抗血清を用いて透過型電子顕微鏡にて検索中である。
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