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2004 年度 実績報告書

ネガティブ選択法による低酸素誘導細胞死受容体(HIA-R)のリガンド探索

研究課題

研究課題/領域番号 16601002
研究機関山口大学

研究代表者

水上 洋一  山口大学, 総合科学実験センター, 助教授 (80274158)

研究分担者 秋 利彦  山口大学, 総合科学実験センター, 助手 (60304474)
波多野 直哉  香川大学, 医学部, 助手 (10332280)
キーワードオーファン受容体 / 心臓 / アポトーシス / がん / プロテオーム / リガンド探索
研究概要

申請者は、酸化ストレスに応答するオーファン受容体の探索法を独自に開発し(水上特願平成13年)スクリーニングした結果、p53を活性化し細胞死を誘導する新しい受容体を発見し(Kimura and Mizukami, JBC,2001)、この受容体を低酸素誘導細胞死受容体(Hypoxia-induced apoptosis receptor, HIA-R)と呼ぶことにした。本研究の目的は申請者が開発したHIA-Rノックアウトマウスを用いて(1)HIA-Rの生理的リガンドを同定することさらに(2)HIA-Rのストレスに対する生理機能を解明することである。
HIA-Rノックアウトマウスの作製に取り組みヘテロマウスが誕生している。ホモマウスは出産しないため、バッククロスをかけ出産可能なマウスへの掛け合わせを行っている。現在3世代のクロスが終了し、これから残り2世代のクロスが終了した時点でホモマウスを作成しリガンドスクリーニングを行う。また、ポジティブコントロールのために受容体が細胞膜に移行した変異細胞のクローニングに成功した。GPR30膜移行変異細胞を用いてスクリーニングを開始する。リガンドスクリーニングのための細胞内カルシウム測定の確立(AquaCosmos浜松ホトニクス山口大学現有)が終了し確実にカルシウム濃度での測定が可能になっている。低分子生理活性物質の精製法の確立も行われており、熱変性タンパク質の限外濾過、ゲル濾過による分離条件が確立出来ている。香川大学波多野助手は最新鋭の質量分析計(Q-Tof ultima MicroMS香川大現有)によるオーファン受容体のプロテオミクス解析法を確立し、HIA-R結合蛋白としてすでに59個のアミノ酸配列の決定に成功している(日本生化学会で発表済みin preparation)。

  • 研究成果

    (8件)

すべて 2005 2004

すべて 雑誌論文 (8件)

  • [雑誌論文] Prognostic significance of Jabl expression in laryngeal squamous cell carcinomas2005

    • 著者名/発表者名
      Dong, Y.
    • 雑誌名

      Clin Cancer Res. 11

      ページ: 259-266

  • [雑誌論文] Induction of cytochrome CYP4F3A in all-trans-retinoic acid-treated HL60 cells2004

    • 著者名/発表者名
      Mizukami, Y.
    • 雑誌名

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 314

      ページ: 104-109

  • [雑誌論文] Identification of active metabolite of ticlopidine from rat in vitro metabolites2004

    • 著者名/発表者名
      Yoneda, K.
    • 雑誌名

      Brit.J.Pharmacol 142

      ページ: 551-557

  • [雑誌論文] ERK1/2 regulates intracellular ATP levels through a-enolase expression in cardiomyocytes exposed to ischemic hypoxia and reoxygenation2004

    • 著者名/発表者名
      Mizukami, Y.
    • 雑誌名

      J.Biol.Chem. 279

      ページ: 50120-50131

  • [雑誌論文] Mechanism of the generation of autonomous activity of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IV.2004

    • 著者名/発表者名
      Tokumitsu, H.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. 279

      ページ: 40296-40302

  • [雑誌論文] Calcium/calmodulin-dependent protein kinase I inhibits neuronal nitric-oxide synthase activity through serine 741 phosphorylation2004

    • 著者名/発表者名
      Song, T.
    • 雑誌名

      FEBS Lett. 570

      ページ: 133-137

  • [雑誌論文] Regulatory mechanism of Dictyostelium myosin light chain kinase A.2004

    • 著者名/発表者名
      Tokumitsu, H.
    • 雑誌名

      J Biol Chem 279

      ページ: 42-50

  • [雑誌論文] Proteomic analysis of rat liver peroxisome : presence of peroxisome-specific isozyme of Lon protease.2004

    • 著者名/発表者名
      Kikuchi, M.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. 279

      ページ: 421-428

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公開日: 2006-07-12   更新日: 2016-04-21  

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